参薯DELLA基因家族鉴定及分析

DELLA基因家族是参与赤霉素信号调节过程的负调控因子,DELLA常与其他转录因子结合,通过影响这些转录因子起作用。为了解析参薯中DELLA基因家族的调控网络,本研究对参薯DELLA基因家族进行鉴定,对其理化性质、系统进化树、保守基序、亚细胞定位预测,赤霉素处理后基因转录谱、互作转录因子进行分析。研究发现,参薯DELLA基因家族包含4个家族成员,都为酸性蛋白。系统进化树分析发现DaDELLA2与拟南DELLA基因处于同一分支,保守基序分析发现除DaDELLA4外,都含有10个蛋白保守序列,DaDELLA定位主要分布在细胞质和细胞核中。根据转录谱发现,赤霉素处理15 d和60 d后,转录因子DaAP2.7-LG16在块茎中表达量最高。分子实验表明DaDELLA2自激活发生在DELLA蛋白N端,与DaAP2.7-LG16存在互作,且互作用主要发生在DELLA蛋白的N端。以上研究对参薯DELLA蛋白基因家族进行初步分析,为进一步的研究提供基础。     

毛薯多糖提取分离工艺优化及抗氧化活性研究

毛薯是海南的传统杂粮，富含植物多糖。本研究以毛薯块茎粉末为材料探究毛薯多糖的提取工艺和抗氧化活性。采用热水提取法分别进行单因素和三因素三水平L9(33)正交实验，优化毛薯多糖提取工艺。毛薯粗多糖溶液经Sveag法除蛋白、透析、DEAE-52纤维素柱和SephadexG-100凝胶柱层析分离纯化得到毛薯精多糖。采用DPPH法、羟自由基法、超氧阴离子法和还原法检测毛薯多糖的抗氧化活性。结果表明：热水提取法最佳工艺条件为温度70℃、料液比1∶15、提取时间3 h，毛薯多糖提取率为1.94%；毛薯多糖经过多次分离纯化后，得到纯度均一的中性多糖；毛薯精多糖DPPH自由基清除能力较弱，1～5 mg/mL的清除率保持在10%左右，且随着多糖浓度的升高，清除能力逐渐下降；毛薯精多糖羟自由基活性随着多糖浓度的升高，活性逐渐增加，在5 mg/mL时清除率最高达到34.74%；毛薯精多糖超阴氧离子自由基活性随着多糖浓度的升高，活性逐渐降低，在1 mg/mL时清除率最高达67.35%；毛薯精多糖还原能力较弱，1～5 mg/mL的还原力最高为0.17。该研究优化了毛薯多糖的提取工艺，毛薯多糖具有一定的抗氧化活性...     

参薯愈伤组织诱导及其悬浮细胞培养体系的建立

为确定参薯愈伤组织诱导的最佳激素浓度及悬浮细胞培养条件，以3种基因型参薯(Dioscorea alata)组培苗的腋芽茎段为材料，采用三因素三水平正交实验来探究不同浓度组合的6-BA、NAA和毒莠定(picloram, PIC)对愈伤组织诱导率的影响；为了初步建立愈伤组织悬浮细胞培养体系，采用单因素实验探讨初始悬浮细胞接种量、蔗糖浓度、摇床转速、酪蛋白浓度和光照时间对其细胞生物量的影响。实验结果表明：在1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.5 mg/L PIC激素浓度组合下，参薯Da70号组培苗(Da70)的愈伤诱导率为90%，愈伤状态较好，不同激素对愈伤诱导率的影响分别为NAA>PIC>6-BA。在单因素悬浮细胞培养实验中，10 mL的初始悬浮细胞接种量、10 g/L的蔗糖浓度、100 r/min的摇床转速、50 mg/L的酪蛋白浓度和0 h光照有利于细胞生物量的增加。参薯悬浮细胞生长总体上呈现“S”型，且在第18天时，鲜重为0.159 3 g，干重为0.042 3 g，细胞活力OD值为0.485 0，达到峰值。本研究为后续原生质体的分离以及功能基因的...