农杆菌介导外源基因在棉花中的表达

用 5～ 6d的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培养 ,菌株质粒中 Gus基因为标记基因 ,NPT 基因为选择基因。在含 0 .1 mg· L- 12 ,4- D和 0 .1 mg· L- 1KT的 MS培养基上共培 48h,转移到添加头孢霉素 50 0 mg· L- 1、卡那霉素 50 mg· L- 1MS培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织 ,70～ 80 d时 ,进行 Gus检测 ,选择 Gus阳性愈伤组织 ,经体细胞分化生成转基因再生植株     

关键因子对棉花利用农杆菌介导法导入外源基因的影响

用5～6d的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培,将Bt基因和tfdA基因导入棉花。菌株质粒中GUS基因为标记基因,NPTⅡ基因为选择基因。在含有0.1mg/L2,4-D和0.1mg/LKT的MS培养基上共培48h,转移到添加头孢霉素500mg/L、卡那霉素50mg/L培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织。70～80d时,进行GUS检测,选择GUS阳性愈伤组织,经体细胞胚     

芦笋离体培养快速繁殖技术研究

芦笋为雌雄异株植物，在自然群体中，其单株之间的遗传组成极为复杂，由于长期异交，种性退化十分严重，所以通过种子繁殖不能保持品种的优良性状。而分株无性繁殖速度慢，繁殖系数低，成为其产业化进程中的限制因素。 　　目前，我国尚不能生产芦笋的种子，生产用种一直靠国外进口。随着芦笋品种的更新，今后尚需不断进口种子，此不仅消耗大量外汇，而且种子纯度差，直接影响其产量和品质。近20年来，细胞工程技术的研究和发展为多种植物的快速繁殖开辟了新的途径，其不仅能够保持品种的优良特性，而且能够加大繁殖系数。本文旨在利用细胞工程技术以实现芦笋的快速繁殖。 1　材料和方法 1.1　材料 　　选取当地推广品种的饱满种子或带有茎尖和腋芽的嫩茎。 1.2　方法 1.2.1　种子消毒　将所选种子浸泡7～10天，用过氧化氢处理并且冲洗后，于无菌水中浸泡3天，然后种于MS培养基上，10天后观察有80%胚根露出，继而胚根和芽渐渐生出，等幼苗长出4～5cm时切断，并且每个茎段至少带一个茎尖和腋芽，然后将茎段种于分化培养基上。 1.2.2　茎段消毒　将新鲜茎段用自来水冲洗干净，0.1%升汞处理并且冲洗之后，切段种于分化培养基上。 1.2.3　培养基　基本培养基MS：蔗糖浓度3%，琼脂浓度0.65%，pH5.8。 　　诱导腋芽培养基：MS附加BA和NAA的比例为4～6为宜。据报道：以UC72三年生雄株为材料，用MS＋NAA 0.2mg/mL＋BA 1.2mg/mL培养基，诱导腋芽分化率高。接种1个月分化率达75%～95%［1］。 　　诱导生根培养基：MS附加IBA和BA，其中IBA和BA的比例以10∶1为宜。据报道：以UC72五年生雄株为材料，用1/2MS＋IBA 2.5mg/mL＋BA 0.25mg/mL+VB1 0.3mg/mL培养基诱根率比较高。接种1个月生根率达86%。平均根数达9.26条，畸形根数达8%［2］。 1.2.4　培养条件　培养温度：26±1℃；光照时间：每日光照14h；光照强度：2000lx。     

玉米F1杂交种对黄曲霉菌穗腐病和黄曲霉毒素积累的抗性

黄曲霉毒素是由黄曲霉菌(Aspergillus flavus Link:Fr)产生的一种致癌毒素.由黄曲霉毒素造成的严重污染影响玉米籽粒的销售和运输.试验目的是:(1)测定由理想的抗病玉米自交系导致F1 对黄曲霉菌和黄曲霉毒素积累的相对抗性,而不考虑杂种优势类型.(2)通过双列分析分析该自交系的遗传基础.(3)找出哪个自交系在分子标记图谱和育种程序中是最理想的抗性资源.在所有组合中,将两个重要自交系和6个暂定与降低穗腐病和抑制黄曲霉毒素产生有关的自交系进行杂交.对其F1杂交种进行了为期两年的评价.中丝期20～24 d后,用针板法将黄曲霉菌分离菌的分生孢子混合物接种果穗.在接种区将各小区的果穗按可见穗腐病百分率进行分级.用间接竞争ELISA测定收获果穗的黄曲霉毒素B1水平.测得抗病自交系×抗病自交系F1对穗腐病和黄曲霉毒素积累的抗性水平最高,它们与许多自交系×已知抗性的自交系F1没有显著差异.双列分析表明所有杂交种和自交系Tex6和Oh516的穗腐病黄曲霉毒素水平的一般配合力(GCA)效应高度显著.结果表明在多种遗传背景下,Tex6和Oh516位分子标记图谱测定和抗性育种程序中是最理想的抗病资源.