巴西橡胶树棒孢霉落叶病病菌蛋白激酶基因突变体△CCK1的互补载体构建及转化

为了明确蛋白激酶CCK1在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌中的致病相关功能,在前期研究基础上通过PCR扩增,获得了该基因1604 bp的5′端片段（L－C5）和131 bp的3′端片段（L－C3）,同时以pCAMBIA3300质粒为模板扩增获得了552 bp抗性标记基因（L－Bar）,并用In－FusionHD Cloning Kit将L－Bar基因反向插入了L－C5和L－C3序列之间,克隆至pUC19载体上,成功构建了△CCK1突变体的互补载体p△CCK1－C。再从该载体上扩增互补片段,借助PEG介导法转化△CCK1突变体的原生质体,经Basta平板筛选、PCR检测和测序鉴定表明,获得了△CCK1突变体的互补转化子。为进一步明确CCK1基因在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌中的致病相关功能打下了材料基础。     

借助ITS序列用GFP标记巴西橡胶树棒孢霉落叶病病原菌

由多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)侵染引起的巴西橡胶树棒孢霉落叶病是影响橡胶树产胶量的主要病害之一。为了开展该病原菌在活体叶片中的病理学研究,本实验将绿色荧光蛋白gfp基因表达盒插入了多主棒孢菌经定点突变后的ITS序列中,构建了重组质粒p ITGH,并经PEG介导转化了原生质体,获得了GFP标记的多主棒孢菌转化子,所获得的转化子经过连续7次转接培养后仍能在分生孢子、分生孢子梗、芽管和菌丝中稳定地发出强烈的绿色荧光,其生长特性和致病性与野生菌株无明显差异。     

杧果蒂腐病生防菌诱变育种及其与常用农药优化组合筛选

经过5次紫外线诱变共获得16株对杧果蒂腐病菌抑菌作用增强的菌株,其中芽孢杆菌4a-3-4、4a-3-1、4a-3-2、5a-2-1,酵母菌E3-3-1、B2-2-2的抑菌圈直径分别增大了47.6％、42.9％、38.1％、36.8％、36.8％和29.4％,诱变效应明显.耐药性筛选显示多菌灵2μg/mL及甲基托布津1 μg/mL可与诱变生防菌形成优良组合.杧果果实抑菌试验表明,大部分生防菌与药剂间具有协同作用.其中,甲基托布津与芽孢杆菌4a-3-4、5a-2-1、酵母菌E3-3-1组合的抑菌效果分别为75.0％、74.5％和73.5％,比仅用甲基托布津处理的抑菌效果提高了8.0个百分点、7.5个百分点和6.5个百分点;多菌灵与芽孢杆菌4a-3-4、5a-2-1组合的抑菌效果分别达73.40％和72.7％,比仅用多菌灵的抑菌率提高了2.3个百分点和1.6个百分点.