2型猪链球菌的血清学鉴定

本试验首次证实了２型猪链球菌在我国的存在，采用玻片凝集、琼脂扩散及毛细管沉淀等３项试验，对１９９０年以来广东某猪场断奶仔猪暴发流行的败血症、脑膜炎及关节炎病猪中分离的１５株链球菌进行了血清学鉴定。结果表明：１５株链球菌均为２型猪链球菌；用高压法提取抗原进行沉淀反应，其结果比酸热法提取抗原具有简便、敏感、特异性强的特点。     

环状抗菌肽cyclopsychotride在毕赤酵母X -33中的表达及其活性鉴定

为提高重组外源蛋白在毕赤酵母中的高效表达,试验采用毕赤酵母(Pichia pastoris)偏嗜性密码子改变抗菌肽cyclopsychotride的碱基序列,通过SOEing法合成后连接到pPICZα -C质粒上,从而获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα -C- cyclopsychotride,再通过限制性内切酶B...     

当前猪病毒性腹泻流行特点与防控建议

一、流行病学(一)流行特点近年来,严重的猪病毒性腹泻主要发生在泰国、日本、韩国及我国等亚洲养猪国家,主要病原为猪流行性腹泻病(PED),而猪传染性胃肠炎(TGE)和猪轮状病毒(RV)较少见。偶尔有三个病原同时出现,或两个组合,多以PED为主。该病主要发生于冬春寒冷潮湿季节,但近年来个别猪场处理不当时可一年四季反复发生。我国PED流行毒株基因有所变异,毒力有所增强。防控     

《家畜传染病学》教学改革

《家畜传染病学》是兽医专业的一门重要专业课,也是预防兽医学的核心课程之一.它是研究家畜传染病发生和发展规律及如何预防、控制与消灭方法的科学.改革开放以来,我国畜禽业生产结构发生了革命性的变化,以集约化为主体的多种规模养殖成为当今的主体,另一方面,随着科学技术的突飞猛进,许多新的技术应用大大丰富了本学科的内涵.     

口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为研制口蹄疫病毒(FMDV)的新型重组腺病毒疫苗,本研究通过RT-PCR扩增FMDV GD株3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因,分别构建重组腺病毒穿梭质粒,并在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183E.coli中同源重组获得腺病毒重组质粒pAd-3C、pAd-P1、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得含有目的基因的重组腺病毒。将具有感染能力的复制缺陷型重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1、rAd-P1-2A、rAd-L-P1、rAd-L-2A共感染Vero细胞,裂解细胞收集细胞上清液并进行小鼠免疫试验。经ELISA检测表明,重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1-2A、rAd-L-2A共感染Vero细胞上清液能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

猪流行性腹泻病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

为了研制一种能够高效表达猪流行性腹泻病毒S1主要抗原表位基因的新型疫苗,将S1主要抗原表位基因整合到酵母表达载体pPICZαC中,构建了重组质粒pPICZαC-S1,对重组质粒经Sac Ⅰ酶切线性化后通过电转化法转化到毕赤酵母X-33中,经Zeocin^TM抗性筛选后得到阳性转化子(pPICZαC-S1),转化子接种培养基后用甲醇进行诱导,并对诱导结果进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定。结果表明,纤突蛋白主要抗原表位在毕赤酵母中成功分泌表达,表达的蛋白分子质量为42 ku,且能够与PEDV阳性血清特异性结合。     

蝉抗菌肽基因密码子优化及其毕赤酵母表达载体构建

根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的抗菌肽Cryptonin基因片段。基因克隆到pGAPZα-A质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZα-A-Cryptonin。经酶切分析、PCR和测序鉴定证明载体构建成功。表达载体的正确构建为Cryptonin的高效表达和生物学活性研究奠定基础。     

猪流行性腹泻病毒重组腺病毒疫苗的构建及小鼠免疫试验

通过RT-PCR和重组PCR技术扩增出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)疫苗株sM、M、S基因,构建重组腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与BJ5183细菌同源重组构建同源重组腺病毒质粒,同源重组腺病毒质粒经Pac Ⅰ酶切后转染AD-293细胞,获得3个含有目的基因的重组腺病毒。将3个具有感染能力的复制缺陷性重组腺病毒共同感染Vero细胞,细胞上清液进行小鼠免疫特性研究。结果表明,共同感染Vero细胞所得蛋白能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中的高效表达

为高效表达黑曲霉糖化酶基因,根据GenBank中糖化酶的氨基酸序列(登录号:AY652617),选用毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏嗜性,全基因合成新的cDNA序列。改造后的基因克隆到pGAPZαA质粒中,获得重组分泌型酵母表达质粒pGAPZαA-EC,经限制性内切酶Bln Ⅰ酶切线性化后,电击转化入毕赤酵母细胞X33内。经高浓度博莱霉素抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测结果显示,糖化酶基因与毕赤酵母染色体稳定结合。糖化酶蛋白获得分泌表达,SDS-PAGE分析其分子质量约为80 ku,其表达量约为180 mg/L。表达产物经Starch-PAGE活性染色,显示其具有酶学活性。