REV囊膜糖蛋白的表达、纯化及单克隆抗体的制备和初步鉴定

以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。     

沙门氏菌invH基因的序列分析与分子检测

根据沙门氏菌的invH基因序列设计1对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门氏菌标准菌株和5种非沙门氏菌株进行PCR扩增,结果3种标准沙门氏菌株均扩增出479 bp的特异条带,非沙门氏菌皆无特异带扩增。对3种标准株的扩增片段进行克隆及序列分析,证实沙门氏菌的invH基因序列比较保守;对19种地方分离沙门氏菌进行PCR特异性检测,结果有16株扩出特异性条带,表明本研究建立的沙门氏菌检测方法具有较高的特异性。     

泰山松花粉多糖对鸡感染vvIBDV诱导的免疫抑制的免疫调理作用

鸡传染性法氏囊超强毒株(vvIBDV)可引起鸡群高死亡率及严重的免疫抑制,给养禽业带来巨大的经济损失。为了探究泰山松花粉多糖(TPPPS)对鸡传染性法氏囊病(IBD)的免疫调理作用,本研究以IBDV GX8/99超强毒株经鼻腔感染19日龄SPF鸡,并分别于感染前、后连续14d口服饲喂TPPPS,同时设置IBD疫苗对照组,病毒对照组和健康对照组,分别对各组试验鸡体质量及法氏囊指数、法氏囊带毒量及抗体变化,以及其他相关免疫学指标进行检测比较。结果显示,连续14d口服TPPPS后,试验鸡体质量及法氏囊抑制程度得到明显改善,法氏囊带毒量减少,法氏囊损伤程度降低,IBD抗体分泌提前、分泌量增加,IL-2、IL-4细胞因子分泌水平提高,T淋巴细胞转化率、CD4+和CD8+T细胞数增加,ND抗体水平提高,其中TPPPS预防组的各项检测指标均高于TPPPS治疗组和IBD疫苗组。结果表明,TPPPS对vvIBDV诱导的鸡群免疫抑制具有一定的免疫调理作用,且以在病毒接种前口服TPPPS发挥的免疫调理作用最显著,TPPPS可以作为免疫增强剂用于防控vvIBDV的早期感染,降低其免疫抑制程度,减少经济损失。     

鸭补体C3d基因cDNA的克隆、鉴定及原核表达

补体C3d是补体系统（Complement system,CS）中补体c3的最终裂解产物。利用RT—PCR技术从鸭肝脏总RNA中扩增出C3dcDNA,克隆测序证实所得为C3d基因。然后将其连接至表达载体PGEX-6P-1,转化人E．coli BL21并用IPTG诱导表达。SDS—PAGE分析表明目的蛋白得到高效表达,Western—blotting进一步证实目的蛋白为C3d。本研究可为开发利用鸭C3d奠定基础。     

禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用

以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段.构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku.将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA).经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%.该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段.     

植物乳杆菌-泰山松花粉多糖微胶囊对小鼠生长和肠道环境的影响

植物乳杆菌作为微生态饲料添加剂饲喂后易受消化道胃酸、胆汁酸和消化酶等不利因素的影响。泰山松花粉多糖(TPPPS)作为一种水溶性植物多糖也易受到胃酸和酶的破坏。为了保护植物乳杆菌和TPPPS的生物活性,并探索二者之间是否存在协同作用。本研究以植物乳杆菌和TPPPS为芯材制备微胶囊,通过正交试验对包埋工艺进行优化,并对最佳条件下制备的微胶囊进行性能检测。选取体重20 g左右无特定病原体(SPF)小鼠48只,随机分为4组,每组12只。4组小鼠每天分别口服饲喂1 m L的植物乳杆菌、植物乳杆菌+0.5%TPPPS、微胶囊、磷酸盐缓冲液(PBS)。饲养试验42 d。每隔1周各组随机取3只小鼠称重记录,剖检后无菌采集肠道组织,测定小肠绒毛和隐窝发育差异及乳酸菌和大肠杆菌定植情况。结果显示:1)微胶囊包埋率达81.6%,粒径为84.3μm。在模拟胃液中处理120 min植物乳杆菌存活率为62.36%,37℃条件下存储120 d存活率达45.9%。2)与PBS组相比,植物乳杆菌、植物乳杆菌+0.5%TPPPS、微胶囊均能不同程度促进小鼠体重增加,提高小肠中乳酸菌数量,降低大肠杆菌数量,改善小肠绒毛和隐窝发育,微胶囊效果最优。结果提示,植物乳杆菌协同TPPPS使用的益生效果显著优于单独的植物乳杆菌,二者制备的微胶囊能够进一步提高其益生效果。     

鸭补体C3d基因eDNA的克隆、鉴定及原核表达

补体C3d是补体系统(Complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物.利用RT-PCR技术从鸭肝脏总RNA中扩增出C3d eDNA,克隆测序证实所得为C3d基因.然后将其连接至表达载体PGEX-6P-1,转化人E. coliBL21并用IPIG诱导表达.SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到高效表达,Western-blotting进一步证实目的蛋白为C3d.本研究可为开发利用鸭C3d莫定基础.     

乡村特色产业发展创新路径研究——以山东省青州市花卉产业为例

为探究乡村特色产业可持续发展的路径,以山东省青州市花卉产业为例,采用查阅文献、实地走访、调查问卷、个人访谈等方式,分析其现阶段的发展模式,发现存在产业链不够完整、产品同质化严重、技术研发实力不强、品牌创新意识不够等问题,结合青州市实际发展情况,提出了坚持市场导向和政府引导、坚持适度规模与提质增效、坚持技术引进与自主创新等发展措施,促进乡村产业发展,只有坚持党建引领,才能推动乡村产业的振兴,实现乡村振兴。     

推进乡村生态振兴与农业绿色发展的探索

近年来，我国农业农村地区伴随着乡村生态振兴有了长效地发展，在经济发展、生态质量、绿色农业等方面也 有了较大的成功，但依然面临着农村资源短缺、生态意识薄弱、法律制度及基础设施相对落后的局面。因此，坚持绿色 可持续发展战略、因地制宜发展绿色产业、加强村民环境保护意识和生态文明素质已成为当务之急。基于此，本文将 对乡村生态振兴战略引领下的农业绿色发展进行问题分析和实施路径探索。