β-雌二醇和孕酮促进非洲猪瘟病毒体外复制

旨在探究雌二醇(β-estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)体外复制的影响。采集空怀猪血清(non-pregnant swine serum,NPSS)和怀孕猪血清(pregnant swine serum,PSS)处理后,用添加胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、NPSS和PSS的培养液分别培养猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)和骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)并感染ASFV,利用绝对定量PCR和Western blot检测ASFV复制差异;用E2和P4 ELISA试剂盒检测各组血清中E2和P4含量;并在FBS组中单独或者混合添加E2和P4后感染ASFV,检测ASFV复制差异;用NPSS和PSS培养BMDM 24 h后,相对定量检测β-干扰素及下游抗病毒因子转录差异。PSS培养组ASFV复制高于NPSS培养组;PSS中E2和P4的含量均高于NPSS,且FBS中E2和P4的含量很低;在FBS组中单独或者混合添加E2和P4后ASFV复制量增加;PSS培养BMDM后会抑制β-干扰素及下游抗病毒因子的转录。PSS中高含量的E2和P4促进ASFV复制,本研究为解释临床上猪群感染非洲猪瘟(African swine fever,ASF)后母猪首先发病且怀孕母猪病情较重的现象提供一定的科学依据。     

猪源组织蛋白酶S抑制O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

前期研究数据表明组织蛋白酶S（cathepsin S，CTSS）在猪初乳中表达水平显著高于常乳，且CTSS有抑制病毒复制的作用，本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus serotype O，FMDV-O）复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞因子的影响。FMDV-O感染PK-15细胞，利用RT-qPCR和Western blot分别在转录和翻译水平探究FMDV-O感染对内源性CTSS表达的影响；使用CTSS活性检测试剂盒测定FMDV-O感染对CTSS酶活性的影响；根据GenBank公布的CTSS基因序列（XM_021089893.1）构建CTSS真核表达质粒，利用脂质体方法转染PK-15细胞，通过Western blot检测CTSS表达情况，并在此基础上通过Western blot和RT-qPCR检测过表达CTSS对FMDV-O复制及FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子mRNA水平的影响；进一步针对CTSS设计合成3对特异性siRNA，利用Western blot和RT-qPCR检测CTSS和FMDV-O的变化。结果表明，FMDV-O感染PK-15细胞能显著上调猪源CTSS表达并增强CTSS酶活性；过表达CTSS能抑制FMDV-O在PK-15细胞中复制，这种抑制作用可能是通过促进FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子产生而发挥功能的；干扰序列siRNA-2947下调内源性CTSS表达进而促进FMDV-O的复制。猪源CTSS促进宿主抗病毒细胞因子产生可能是抑制FMDV-O复制的原因之一，本研究为深入探究宿主CTSS在抗FMDV天然免疫应答中的作用及机制提供依据。     

2012农村科技发展迎来重要机遇期

饱含对新年的期待,不知不觉中,已跨、了2012年的门槛。亲爱的读者朋友,让我们一起擦拭记忆,幢憬未来2011,全球大环境极不平静。欧洲债务危机恶化,全球经济成长放缓,新兴市场实施紧缩政策,美国政治陷入僵局,日本发生地震与核事故。依靠出口带动经济增长的动力已经减弱,转变经济增长方式迫在眉睫。充分发挥科技创新作用,加快推进产业结构调整.加大自主创新和产业升级.是当前料技发晨的使命与责任门     

真抓实干 绿化文山——文山州林业工作会议侧记

1991年10月16日,文山壮族苗族自治州州委礼堂彩旗飘扬,新中国成立42年来文山州规格最高、规模最大的林业工作会议在此举行。大会会场摆满青松翠柏、时令花卉。此时,虽序属深秋,但仍让人感觉到了一种生机盎然,欣欣向荣的蓬勃。在主席台上方悬挂着“中国植树节”纪念徽;后墙上,“力争10年绿化文山大地”的横幅格外引人注目。出席会议的200多名州、县及有关部门的     

搭建协同创新平台驱动“三农”同步发展

党的十八大提出了“创新驱动发展战略”，全国科技创新大会对深化科技体制改革进行了总体部署，要求大力推进以企业为主体的技术创新和产学研协同创新。“三农”工作是全党全国工作的重中之重。实现“四化同步发展”，重点难点在农业农村。如何落实创新驱动发展战略，推进我国农村经济、政治、文化、社会、生态五位一体建设，成为政、产、学、研各界共同关注的焦点。     

非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒（ASFV） D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL软件预测了该基因所编码蛋白序列的二、三级结构;根据GenBank公布的ASFV序列（LR743116.1）,合成D1133L基因并构建其重组真核表达质粒pCMV-D1133L,蛋白免疫印迹（Western blot,WB）验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,应用间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay,IFA）研究了该蛋白的亚细胞定位。结果表明,通过ASFV解旋酶的基因系统进化树,发现5种解旋酶基因均相对保守。D1133L基因全长3 402 bp,表达的蛋白为124.63 ku,G+C含量为6.1%,A+T含量为10.6%;二级结构分析表明α螺旋占48.90%,扩展链占13.50％,无规卷曲为33.27%;三级结构分析表明六自由度结构（six degree of freedom,QMQE）为0.20,覆盖率84%,且预测以α螺旋为主的高级结构;通过LOCSVMPSI分析预测,显示D1133L蛋白定位于细胞核内与细胞质内的概率是相同的。WB结果显示pCMV-D1133L质粒正常表达,IFA试验证明ASFV编码的解旋酶D1133L同时分布于细胞核和细胞质。本研究通过对D1133L基因序列、结构功能预测,并通过IFA验证了D1133L亚细胞分布,为进一步揭示D1133L基因功能奠定了一定基础。     

过表达非洲猪瘟病毒D1133L蛋白的MA-104细胞系建立及其初步应用

旨在研究非洲猪瘟病毒(African swine fever, ASFV)编码的D1133L基因功能,本文利用慢病毒表达系统构建了过表达D1133L的MA-104/D1133L细胞系,分析ASFV在MA-104/D1133L细胞系与MA-104细胞中的复制差异。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染MA-104/D1133L细胞后p30和p72基因的转录和蛋白表达水平,同时测定病毒滴度和病毒拷贝数评价ASFV的复制能力。结果表明：ASFV p30和p72基因在MA-104/D1133L细胞系的转录和蛋白表达水平高于野生型细胞系,ASFV在MA-104/D1133L细胞系的病毒增殖能力高于野生型细胞。本研究成功构建了过表达ASFV D1133L基因的MA-104/D1133L细胞系,与野生型细胞相比,D1133L能促进ASFV增殖,MA-104/D1133L细胞系更利于ASFV的复制,本结果为进一步研究ASFV D1133L基因功能积累了生物材料。