蛹虫草子囊孢子单孢分离与交配型基因鉴定

[目的]明确蛹虫草亲本和子囊孢子单孢菌株交配型基因类型.[方法]以自主分离保存的CM1901菌株新鲜子实体为材料,采用孢子弹射和梯度稀释培养法,获得子囊孢子单孢菌株.采用PCR方法对蛹虫草的亲本及单孢菌株的交配型基因进行鉴定.[结果]获得102个子囊孢子单孢菌株.亲本菌株同时含有MAT1-1和MAT1-2两种交配型;102株单孢分离株中,仅含MAT1-1交配型菌株57株,仅含MAT1-2交配型菌株24株,另外21株为亲本型(同时含有MAT1-1和MAT1-2),MAT1-1∶MAT1-2为78∶45.[结论]分离获得102个蛹虫草子囊孢子单孢菌株,发现这些单孢菌株交配型有3类,且MAT1-1∶MAT1-2比例为78∶45,与理论值1∶1有较大差值,所以蛹虫草不属于典型的二极性异宗配合型子囊真菌.     

一株小脆柄菇的分离培养及木质素降解酶活性

【目的】为一株野生小脆柄菇开发利用奠定理论和实验基础。【方法】采用组织分离法获得菌株纯培养,提取菌丝体总DNA提取、ITS扩增与测序、BLAST在线比对,利用MEGA 7.0软件进行构建发育树,并计算遗传距离。综合菌丝生长速率和长势,确定其最适生长条件。采用光吸收法测定漆酶、锰过氧化物酶和木素过氧化物酶酶活。【结果】获得纯培养菌株,编号F1734,经鉴定为白黄小脆柄菇(Psathyrella candolleana)。菌丝最适生长条件结果表明:最适碳源为麦芽糖,最适氮源为胰蛋白胨,最适C/N比为10/1,最适温度范围为25～30℃,最适pH值范围为7.0～9.0。液体发酵产木质素降解酶结果表明,锰过氧化物酶在第7天时达到最大,为(186.32±7.29)U/mL;木素过氧化物酶在第5天时达到最大,为(4 890.20±979.37)U/mL;发酵9d未测得胞外漆酶活性。【结论】F1734菌株为白黄小脆柄菇,营养需求简单,属于LiP-MnP类白腐真菌,为其进一步开发利用奠定试验基础。     

4种常见农药的耐受真菌筛选、鉴定及降解作用初探

【目的】针对吡虫啉、草甘膦异丙胺盐、乙酰甲胺磷、高效氯氰菊酯4种常见农药,利用实验室前期分离保存的26种真菌,开展农药高耐受菌筛选,并对高抗菌株进行分子鉴定及农药降解率研究。【方法】以分别添加吡虫啉等4种农药的培养基,进行农药耐受菌株初筛。对获得的4种高抗菌株进行菌丝体总DNA提取、ITS扩增与测序、BLAST在线比对,与GenBank进行序列比对,利用MEGA 6.0软件构建发育树,并计算遗传距离。进一步以HBY-11菌株为对象,测定液体发酵条件下对4种农药的降解率。【结果】结果表明,HBY-11、HBY-12、HBY-17和HBY-23菌株对检测农药的抗性较强,在4种农药的培养基中的平均生长速率分别为:6.92±0.63、6.75±0.25、6.67±0.38、2.79±0.07;6.58±0.14、5.92±0.14、5.25±0.00、1.46±0.07;6.25±0.25、5.5±0.66、3.25±0.13、0.33±0.04 mm/d;3.96±0.14、4.67±0.26、3.0±0.13、0.6±0.07mm/d。HBY-11菌株为残孔菌属(Abortiporus),HBY-12菌株为栓菌属(Trametes),HBY-17菌株为浅黄囊孔属(Flavodon),HBY-23菌株为亚灰树花菌属(Meripilus)。HBY-11对吡虫啉的降解率在12h时最高(66%);对草甘膦异丙胺盐的降解率在72h时最高(65%);对乙酰甲胺磷的降解率在12h时最高(79%);对高效氯氰菊酯的降解率在72h时最高(55%)。     

基于DNA条形码的桑黄真菌分子鉴定

DNA条形码(DNA barcoding)技术是一种利用生物基因组内短遗传标签进行分类鉴定的方法。桑黄自古以来是一种名贵中药材,而市售桑黄主要依托简单的形态鉴定造成混淆众多。近年来大量研究表明,桑黄类真菌种类至少有7个种,并且其药效也不尽相同。【目的】为更准确、高效对桑黄类真菌进行鉴定,本研究以采集自西藏、吉林和浙江的3种桑黄子实体为材料,筛选最佳DNA条形码与相应PCR条件。【方法】利用组织分离获得3种桑黄纯培养菌株,分别编号为1713、1714和HS菌株。利用ITS、NL、rpb1、rpb2和ef1-α等7组DNA条形码分别对3种桑黄进行PCR扩增、测序、比对和发育树分析,并结合形态学特征,确定其最适DNA条形码和分类学地位。【结果】结果表明,ITS和NL条形码对3种桑黄均能够获得单一目的条带;rpb1Y、rpb2B和rpb2Y条形码特异性低,扩增后获得多个条带;而rpb1B和ef1-α条形码均无法获得条带。通过多序列比对,结合形态分析,确定1713菌株为桑黄纤孔菌(Inonotus sanghuang),而1714和HS菌株均为鲍姆纤孔菌(Inonotus baumii)。【结论】本研究确定ITS和NL为桑黄分子鉴定的最佳DNA条形码,其PCR最适退火温度范围分别为58～59℃和49～50℃,为桑黄真菌快速鉴定提供参考依据。