农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究

1材料与方法 1．1材料 1．1．1供试材料。白菜型油菜苏州青,市售。 1．1．2菌株及质粒。采用根癌农杆菌LBA4404,该菌株含有植物双元表达载体pCAMBIA1390,油菜油体基因与bFGF的融合基因已整合到该载体上,该融合基因由油菜油体基因启动子启动。植物基因组提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司,Southern检测试剂盒为DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I,购于Roche公司。     

农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究

[目的]利用植物转基因技术,生产药用蛋白。[方法]以带柄子叶作为转化受体,利用根癌农杆菌介导法将油菜油体基因与bFGF的融合基因转入油菜中,在获得潮霉素（Hyg）抗性植株的同时,对油菜的再生条件进行优化,并对获得的抗性苗进行PCR和Southern检测。[结果]油菜最佳转化再生条件为外植体预培养2d,共培养3d,茵液浓度OD值为0．3,侵染时间5min。[结论]该研究中,融合基因已成功整合到油菜基因组中,为以后转基因植物种子的蛋白提取、分离和纯化奠定了基础。     

番茄不同基因型对植株再生能力的影响

以浙粉202、GBS-傲兰六号、中域·胜宝、中杂九号、中蔬6号5个市售番茄品种为研究对象,设计正交试验对不同品种的植株再生情况进行比较,为后期提供优良的基因工程番茄材料奠定基础。以不同品种番茄的7日龄子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织,继而将其诱导分化成再生植株,对不同番茄品种在种子发芽率、愈伤组织形成率、分化率及生根率方面进行比较。综合发芽率、愈伤诱导及器官再生这三方面因素,中蔬6号番茄的再生效率较高,并将其初步确定为遗传转化受体用于后期药用蛋白的表达。     

油菜子叶及下胚轴对潮霉素敏感性研究

[目的]为油菜潮霉素抗性基因的遗传转化提供依据。[方法]以油菜品种沪油19号、苏州青、五月慢的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度潮霉素处理对其褐化率、出愈率的影响。[结果]潮霉素浓度为3 mg/L时,五月慢、沪油和苏州青的褐化率分别为87.6%、30.7%、40.1%;褐化的临界浓度均为6 mg/L。苏州青下胚轴对潮霉素的耐受性较强,其褐化的临界浓度高于沪油19号和五月慢。潮霉素浓度为6 mg/L时,沪油19号、苏州青、五月慢子叶的出愈率分别为3.7%、2.3%、0,下胚轴的出愈率分别为5.1%、8.1%、2.2%。[结论]以子叶为外植体时,3个品种适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L;以下胚轴为外植体时,沪油19号和五月慢适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L,苏州青为9 mg/L。