抗菌肽CM与haFGF改构体融合基因的构建与表达

构建重组改构体aFGF28-154和抗菌肽CM基因的融合基因,使其在大肠杆菌系统中融合表达,以期获得具有靶向FGFR高表达肿瘤细胞的抗肿瘤融合蛋白.利用PCR引物延伸的方法拼接得到带有G4S铰链的天蚕素-蜂毒素杂合肽CM与aFGF28-154的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET20b中,构建表达质粒pET-CM-aFGF28-154,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),氨苄青霉素抗性筛选重组转化子.IPTG诱导4 h后,菌液经超声破碎,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的18%.将包涵体溶解并通过差速离心除去部分杂蛋白,透析复性并用Heparin Sepharose CL-6B亲和层析,目的蛋白得到初步纯化,为进一步研究蛋白的生物学活性奠定了基础.     

缓释肥对固沙植物甘草施用效果的初步研究

为了解决固沙体系中水与肥的瓶颈问题,尝试在体系中添加缓释肥与高吸水树脂(吸水剂)。在研究缓释肥与自主开发的吸水剂相容性的基础上,在栽培体系中添加一定量的吸水剂与缓释肥,在模拟沙池中试验,以研究该方案对固沙植物甘草的生长发育的影响。研究结果表明:不同的缓释肥对吸水剂的吸水率影响不同,各种缓释肥料在沙土中分解释放速度远小于尿素。在体系中添加一定量的缓释肥均可促进甘草的生长发育,表现在株高、根长、叶片发育、生物量(干重)等方面。本研究为解决固沙植物的水肥问题提供了较好的一个思路。     

人成纤维细胞生长因子-21分泌型表达及鉴定

利用基因工程手段,将人成纤维细胞生长因子-21(hFGF21)与分泌信号肽相融合,构建得到能够分泌表达FGF21蛋白的表达载体.将该表达载体导入到Rosetta(blue)宿主细胞中,在分泌信号肽的引导下,在细胞周质中表达.经IPTG诱导表达可获得分子量为21 kD的蛋白,Western-Blotting证明该蛋白为FGF21蛋白.经SOS-PAGE证明获得了可溶性的FGF21蛋白.该方法简化了纯化工序,提高了成品率,使大规模生产重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF21)成为可能.     

果蝇Drosomycin基因(drs)的克隆鉴定

为了克隆Drosomycin基因用于今后定点诱变修饰和生物技术开发研究 ,根据果蝇Drosomycin基因 (drs)的cDNA序列 ,分别设计Drosomycin基因含和不含信号肽序列的两对特异引物Drs1/Drs2、Dro3/Dro4 ,由黑腹果蝇(DrosophilamelanogasterMeigen)基因组PCR扩增获得目的片段drs和dro ,克隆到表达载体pET 2 1d(+)和pHIL S1之中。经测序表明 ,克隆的drs与文献报道的drs序列仅在 +116位点有 1个碱基的差异 (A/T) ,而克隆的dro序列则与文献报道的dro序列完全相同。