不同核成熟抑制剂对延边黄牛卵母细胞发育的影响

通过在卵母细胞成熟液中单独添加卵母细胞核成熟抑制剂--次黄嘌呤(hypoxanthine,HX)、异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxantihine,IBMX),研究其对卵母细胞卵丘扩散程度、极体形态以及后期发育的影响.结果表明:抑制剂(HX、IBMX)组卵母细胞卵丘扩散程度与对照组相比差异不显著(P>0.05),抑制剂组第一极体完整率显著高于对照组,但抑制剂组囊胚发育率与对照组相比差异不显著.最终结果提示,虽然HX和IBMX并未明显提高卵母细胞发育潜力,但仍为两种行之有效的核成熟抑制剂.     

聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白对牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的影响

为了比较不同浓度的聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清白蛋白(BSA)对牛卵母细胞体外成熟率、重组胚卵裂率和发育率的影响,试验采用抽吸法回收卵母细胞,用不同的无血清成熟液进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养.结果表明,适合延边黄牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的PVA、PVP和BSA的最佳浓度分别是1.0 mg/mL,0.3%和0.4%.     

末期去核在牛体细胞核移植中的应用

受体卵母细胞的去核对核移植的效率起决定性作用。很多去核方法已经应用到体细胞核移植当中,并且成功地产生了核移植胚胎。通常我们使用第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞作为受体细胞进行去核,但是去核效率很低。虽然使用荧光染料和紫外线的照射来完成去核程序可以提高去核效率,但是这些措施有损害细胞质的危险。所以,一种避免使用DNA染料和紫外线照射又能提高去核效率的末期去核方法被发展起来了。本文详述了牛卵母细胞末期去核方法在体细胞核移植中的应用,为从事哺乳动物克隆研究的学者提供参考。     

不同bFF对延边黄牛卵母细胞成熟及发育的影响

在成熟液中添加不同处理及来源的牛卵泡液(bFF),以研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响。结果表明:未抽滤组与抽滤组间成熟率差异不显著(P>0.05),但未抽滤组显著提高囊胚率(P<0.05);卵泡直径2~8 mm组、>8 mm组和混合组(2~8 mm组与>8 mm组的混合)之间成熟率、卵裂率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05);两试验组(黄体组、卵泡组)成熟率、卵裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),两试验组与血清组相比囊胚率显著提高(P<0.05)。试验结果提示,未抽滤黄体期卵巢表面卵泡内bFF能有效提高卵母细胞体外囊胚发育率。     

TMR对延边半细毛羊瘤胃发酵和消化率的影响

试验旨在研究全价混合饲料(TMR)对延边半细毛羊的瘤胃发酵特性及其消化率的影响。结果表明:对安装有瘤胃瘘管的延边半细毛羊分别饲喂粗精分离饲料和TMR后,其pH值变化在各试验组间无显著差异;NH3-N浓度变化在饲喂9h后粗精分离组显著低于TMR组(P<0.01)。瘤胃内protozoa种群变化是TMR组显著高于粗精分离组(P<0.01);饲料的营养消化率在各试验组间无显著差异。     

FSH和LH对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响

实验主要研究促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响,从而提高延边黄牛体细胞克隆的效率。采集屠宰后延边黄牛卵巢,用抽吸法回收卵母细胞,然后在不同种类、浓度激素条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,最后将成熟的卵母细胞进行核移植及重组胚的体外培养。实验分别比较了在0、5、10、15、20μg/mL条件下,单独使用FSH与LH和在15μg/mL的FSH与10μg/mL的LH共同作用下对延边黄牛卵母细胞体外成熟率、卵裂率和囊胚发育率的影响。结果表明:将卵母细胞单独置于加有浓度为15μg/mL的FSH和10μg/mL的LH的成熟液中培养,其成熟率及后期发育率优于其他浓度组(P<0.05);而2种最优浓度同时添加共同作用时要好于单独使用(P<0.05)。由试验可得出,成熟培养液中单独添加15μg/mL的FSH和单独添加10μg/mL的LH浓度对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚后期发育效果最好;使用最佳浓度进行协同作用时,其共同作用要好于单独使用的效果。     

聚乙烯醇、聚乙烯吡略烷酮和牛血清白蛋白对牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的影响

为了比较不同浓度的聚乙烯醇（PVA）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、牛血清白,蛋白（BSA）对牛卵母细胞体外成熟率、重组胚卵裂率和发育率的影响,试验采用抽吸法回收卵母细胞,用不同的无血清成熟液进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养。结果表明,适合延边黄牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的PVA、PVP和BSA的最佳浓度分别是1．0mg／mL、0．3％和0．4％。     

延边黄牛卵母细胞激活后第二极体排出的研究

用乙醇激活不同卵龄(22 h,24 h,26 h,28 h,30 h)的延边黄牛卵母细胞,对第二极体的排出、鉴别以及核物质与第二极体位置关系进行了研究。结果:(1)延边黄牛卵母细胞第二极体排出率随卵龄的增加而增多,而且激活后培养3 h第二极体出现率最高。(2)第二极体的鉴别:根据第一极体退化残留物或第一极体分裂为2个小极体来鉴别第二极体;当2个极体同时存在时,第二极体体积略小、形状不规则。(3)通过Hoechst33342染色观察,核物质与第二极体几乎全部相邻。