化学发光间接竞争ELISA检测伏马毒素B1方法的建立

采用自制的抗伏马毒素B1(FB1)多克隆抗体,建立定量检测玉米中FB1的化学发光间接竞争ELISA方法。通过化学偶联分别获得免疫抗原钥孔血蓝蛋白(KLH)-FB1和包被抗原卵清蛋白(OVA)-FB1。用KLH-FB1免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。以OVA-FB1为包被抗原,FB1为竞争抗原,建立检测FB1的间接竞争化学发光ELISA方法,并对该方法进行了条件优化。该方法对FB1标品进行检测,得到回归方程为Y=0.602 5-0.370 7 X,相关系数R2为0.986 2,检测限为0.14ng/mL,线性关系良好的检测范围为0.14～33.3ng/mL,玉米样品加标回收率83.5%～102%。表明建立的化学发光ELISA法敏感性好、特异性高,能用于玉米中FB1毒素的检测。     

稻米蒸煮品质与营养品质的相关性分析

本研究测定了49个不同米质类型的水稻品种（组合）的直链淀粉含量、蛋白质含量、胶稠度和碱消值，并分析了它们之间的相关性。结果表明：杂交稻与常规稻之间、杂交稻中不同不育系来源的组合之间在上述相关性上既有共性，又有各自的特性；所有品种（组合）的共性为蛋白质含量与胶稠度和碱消值无显著相关；测试品种的总体结果为直链淀粉含量与胶稠度极显著负相关；所有杂交稻的总体分析结果中未发现显著相关性；杂交组合按不同不育系的分类分析表明，Ⅱ优系列组合有别于K优系列和杂交组合的总体分析结果；杂交稻与常规稻之间的最大差异为直链淀粉含量与胶稠度之间的相关性，杂交稻无显著相关，常规稻则显著负相关。     

伏马毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法的建立

采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）和蛋白卵清白蛋白（OVA）偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1。OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体。经三次亚克隆后,筛选出两株（6H3,6H11）能特异、稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体,经检测表明单克隆抗体的亚型为IgG1,轻链为κ型。采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达l∶16 000,抗体对伏马毒素的半数阻断浓度（IC50）为8.26 ng/mL,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素B1等结构类似物几乎不存在交叉反应,与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应。利用获得的抗FB1单克隆抗体,建立了间接竞争ELISA检测方法,检测灵敏度为0.44 ng/mL,检测线性范围为0.93~73.06 ng/mL,加标回收率在线性范围内达到回收率可达78.4%~102%。     

杂交水稻种子闭颖度对种子耐储力的影响

用长粒型优质不育系Q1A为材料,通过人工老化与自然老化相结合,研究了种子闭颖度与耐储力的关系。闭颖不完全的种子由于千粒重低,胚乳储藏营养不足,不利于幼苗前期生长发育,成苗率较低;闭颖程度越低,耐储力越差。种子老化失活主要表现为:胚生命活力完全丧失产生不萌发的死种子;胚生命活力降低产生不能正常成苗的弱种子。闭颖程度较差的种子在衰老过程中产生的弱种子比例较大。闭颖度对种子耐储力影响的主要原因之一是颖壳阻碍了胚与氧气的接触,在真空条件下闭颖度对耐储力的影响减小。在100%的相对湿度、40℃的人工老化条件下处理5 d左右,对种子的老化程度与一次自然室温越夏的老化程度大致相当。     

伏马毒素的毒性作用及其检测方法研究进展

伏马毒素是由串珠镰刀菌产生的一种具有毒性及致癌性的真菌毒素。伏马毒素能够广泛污染玉米等粮食作物及相关食物制品和动物饲料,严重威胁人类及动物健康,成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。本文介绍伏马毒素的危害性及检测的最新研究进展。     

杂交水稻种子纸床和砂床芽率与田间出苗率的相关性

用发芽率偏低的陈种和发芽率较高的新种为材料,研究了19个杂交水稻种子用纸床和砂床两种发芽方式的发芽率与田间出苗率的相关性。结果表明,陈种和新种用纸床和砂床测定的芽率与田间出苗率都呈极显著正相关;陈种用砂床检测的芽率与田间出苗率相关更密切;纸床和砂床测定的芽率之间也呈极显著正相关;高芽率新种用纸床和砂床检测出的芽率无明显差异;发芽率偏低的陈种纸床和砂床芽率之间差异明显,砂床更接近田间播种的发芽条件,纸床可能会出现误判;芽率偏低的陈种用纸床发芽时,芽率比砂床的低。     

2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较

体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。