2株邻苯二甲酸酯高效降解菌的筛选鉴定及其降解性能

为获得用于修复邻苯二甲酸酯(PAEs)污染的高效降解菌,通过富集培养的方法从土壤中筛选出2株PAEs降解菌(RXX-2、RXX-3),经形态观察、生化鉴定和16S r DNA序列分析对菌株进行了鉴定,并对其降解性能进行了分析。结果表明:菌株RXX-2和RXX-3初步鉴定为食异源物鞘氨醇菌(Sphingobium xenophagum)和鳗败血假单胞菌(Pseudomonas anguilliseptica)。菌株RXX-2降解PAEs的最佳条件为p H 8、温度30℃、转速175 r·min~(-1)、接种量1.5%;菌株RXX-3降解PAEs的最佳条件为p H 7、温度30℃、转速175 r·min~(-1)、接种量1.0%。在最佳降解条件下,经过5 d的培养,菌株RXX-2对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)的降解率分别达到71.43%和52.85%,RXX-3对DBP和DEHP的降解率分别达到98.98%和62.96%,表明2株降解菌在PAEs污染环境的生物修复方面具有良好的应用前景。     

河口县牛伊氏锥虫病的调查诊断

牛锥虫病由伊氏锥虫引起,主要表现为进行性贫血、消瘦、黄疸、高热、伴发体表水肿等症状的血缘性寄生虫病,对牛的危害很大.2007年8月以来,河口县老范寨乡桂良村委会茶坪村二组的87头黄牛陆续出现以发热、消瘦、四肢无力为主要症状的病例,经笔者调查诊断,确诊为伊氏锥虫病,情况如下.     

宁波居民食品安全满意度影响因素分析及监管对策研究

以新的公共管理理论和政府监管为基础,以宁波为例进行调查研究,运用探索性因子分析和结构方程模型深入分析了影响食品安全的主要影响因素,发现宁波居民食品安全满意度总指数(68.67)比较低,居民对添加剂的使用、重金属含量、农药残留、卫生状况、执法力度、政府政策和媒体曝光的满意度较低。在此基础上,提出如下建议:监管部门应借助"互联网+"的思维方式和技术手段,完善宁波市食品安全信息发布平台,提高信息透明度;加大执法力度,推行"互联网+"信息化监管新模式,重点监管食品的质量状况;将群众监督和政府监管有机结合,共同打造"互联网+"食品安全社会共治。     

基层农产品质量安全监管措施

从加强组织领导、加强监测体系建设、加强源头监管、创新监管模式、建立奖惩体系、普及农业标准化建设、加强宣传培训等方面总结了基层农产品质量安全监管措施,以期保障基层农产品的质量安全。     

基层动物卫生执法现状与建议

基层动物卫生执法是加强我国卫生体制建设的一项关键工作,是确保畜牧业稳定发展的有效途径,也是保证动物类食品安全的必要举措,更是构建健康、和谐社会的重要措施,所以必须提高执法监督力度,确保相关工作的有效落实。但是,现阶段基层动物卫生执法工作面临着较为严峻的挑战,仍然存在较多的问题亟须解决,所以必须提出合理化建议,采取针对性策略改善基层动物卫生执法现状。     

基层农产品质量安全监管措施

从加强组织领导、加强监测体系建设、加强源头监管、创新监管模式、建立奖惩体系、普及农业标准化建设、加强宣传培训等方面总结了基层农产品质量安全监管措施,以期保障基层农产品的质量安全。     

浸钙、壳聚糖浸泡和温烫处理对台湾青枣果皮褐变的影响

为了探索抑制台湾青枣(Ziziphus mauritiana Lamk.)果皮褐变的绿色冷藏保鲜前处理技术及其抗活性氧损伤的生理机理,采用正交试验设计法,对台湾青枣果实经过浸钙、壳聚糖浸泡和温烫处理,探讨3因素处理后对冷藏台湾青枣果皮褐变的影响。结果表明：浸钙和温烫处理能抑制果皮褐变和降低果皮丙二醛(MDA)含量,而壳聚糖浸泡处理则加剧果皮褐变和提高果皮MDA含量;浸钙和温烫处理抑制果皮PPO活性,而壳聚糖浸泡处理则提高了果皮PPO活性;浸钙和温烫处理能提高果皮SOD和POD活性,壳聚糖浸泡处理则抑制了果皮SOD和POD活性;3因素处理对果皮CAT活性无抑制作用,在高峰期还呈现提高果皮CAT活性的效果。可见,浸钙和温烫处理能改善台湾青枣果实贮藏效果和减轻果皮活性氧损伤。     

流式细胞仪分离奶牛精子性控效果的试验研究

用流式细胞仪分离荷斯坦奶牛的精液,检测在冷冻前和冷冻后分离的精子活力。同时,对不同牛群利用分离得到的性控鲜精和性控冻精进行人工输精,对其人工授精效果和性别控制效果进行观察。结果表明:分选后冻前精子活力达到0.60～0.67,分选后解冻精子活力达0.31～0.39;育成牛群性控鲜精输精的情期受胎率高于使用性控冻精输精,经产母牛群性控鲜精输精的情期受胎率高于使用性控冻精输精,但差异均不显著(P>0.05);使用性控鲜精、性控冻精进行人工输精,育成牛群情期受胎率高于经产母牛群,且差异显著(P<0.05);产母犊率差异不显著(P>0.05);用性控精液人工授精的奶牛早期流产率高于非性控精液,但差异不显著(P>0.05)。     

微小根毛霉耐热α-淀粉酶基因的克隆与高效表达

[目的]开发具有高表达活力的耐热耐酸新型真菌α-淀粉酶,研究其酶学性质和催化活性,探讨其潜在工业应用潜力.[方法]采用RT-PCR从嗜热真菌微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)中克隆耐热α-淀粉酶基因,并命名为RpAmy.以质粒pPIC9K为表达载体,将α-淀粉酶基因(RpAmy)转入毕赤酵母(Pichia pastoris)表达宿主KM71,进行异源表达,并测定动力学参数和酶学性质,分析水解淀粉的产物.[结果]克隆得到嗜热真菌微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)耐热α-淀粉酶基因,其开放阅读框全长1416 bp,编码471个氨基酸,与米根毛霉α-淀粉酶的氨基酸序列相似性最高(56.0%).RpAmy在毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71中表达,最高酶活达到32100.0 U/mL,蛋白表达量为1.5 mg/mL;测定纯化后RpAmy比活力、Km和Vmax,分别为6745.9 U/mg、2.26 mg/mL、0.2875 mg/mL·min;最适pH和最适温度分别为pH 4.0、70℃;具有较宽的pH耐受性(4.0~9.0)和较高的温度耐受性(60℃);水解可溶性淀粉产物主要为麦芽糖(69.0%,w/w)和葡萄糖(22.0%,w/w).[结论]从微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)中克隆得到α-淀粉酶基因(RpAmy),其可在毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71中高效异源表达并得到α-淀粉酶RpAmy.该酶具有较好的耐酸耐热性质,并能水解淀粉产生高麦芽糖含量的糖浆,在工业应用方面具有很大的潜力.     

核糖体失活蛋白(α-MC)亚细胞定位及对TMV的抑制作用

【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和苦瓜素基因全序列,设计并合成扩增PAP和α-MC基因全长引物,通过RT-PCR及基因克隆方法,从苦瓜和商陆春叶克隆得到苦瓜α-MC、商陆PAP;用Wolf PSORT预测蛋白定位,将苦瓜α-MC、商陆PAP分别融合在GFP和Ds Red2的N端,构建融合蛋白表达载体,采用GFP和Ds Red2标记进行亚细胞定位,验证预测结果;通过农杆菌介导在本氏烟中瞬时表达α-MC,再接种烟草花叶病毒,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别检测病毒在接种叶片的蛋白积累量和RNA表达量,分析瞬时表达α-MC的抗病毒效果。利用q RT-PCR分析植物防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,探究其抗病毒机理。【结果】克隆得到基因α-MC和PAP全长,分别为861和939 bp。Wolf PSORT预测显示α-MC和PAP主要定位于细胞质膜上。共聚焦荧光显微镜下观察发现,分别用GFP和Ds Red2标记的α-MC和PAP均定位在本氏烟叶片表皮细胞质膜上,与Wolf PSORT预测的α-MC和PAP定位结果相一致。异源表达的PAP对植物细胞毒性作用强,导致表达部位细胞坏死,异源表达α-MC的植物细胞无明显毒性,表达部位细胞完整。在本氏烟中异源表达α-MC后,再接种TMV-GFP,在紫外灯下观察发现α-MC处理后的本氏烟在接种TMV-GFP 48 h后没有出现绿色荧光,而对照组出现荧光。72 h后处理组出现零星荧光,但对照组的绿色荧光开始扩散,连续观察,处理组几乎没有变化,接种TMV-GFP 6 d后,发现处理组的绿色荧光几乎没有扩大的趋势,而对照组的绿色荧光已扩散至心叶;ELISA检测表明,在接种TMV-GFP 6 d后的叶片中,对照组与健康植物的OD492比值几乎已达到处理组的10倍以上;q RT-PCR检测TMV RNA的含量,结果显示对照组TMV RNA表达量是处理组的149倍左右,表明α-MC对TMV复制和移动均有明显抑制;q RT-PCR结果分析显示,NPR1在只注射TMV、单独表达α-MC以及表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均被诱导表达,但后者的表达量是前两个处理的约2.5倍左右,在只接种α-MC和表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均检测到PR1、PR2,但后者的表达量显著高出前者5—7倍,表明异源表达α-MC可诱导植物中防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,从而引起更强的防御反应。【结论】异源表达α-MC显著抑制TMV,能够激活植物防卫反应,且对植物细胞无明显毒性。研究结果为利用异源表达α-MC方法开发控制植物病毒新产品提供了参考依据。