大豆花粉管通道技术转化雪花莲凝集素(GNA)基因

采用花粉管通道技术,用雪花莲凝集素基因（Galanthus nivalis agglutinin,GNA）转化吉林省主推品种吉林20号、吉林30号、吉林45号品种大豆。通过接蚜鉴定和PCR鉴定,从所获得的种子苗中筛选出转基因植株。对转基因植株的后代进行分子生物学鉴定：（1）PCR分析,转基因植株97TGR1和97TGR2的T2代表现阳性,第5代表现阳性纯合;97TGR1、97TGR2和98FD1～98FD20的T3代Western blotting检测结果证明,GNA基因在蛋白质水平有表达,最高表达量占总可溶性蛋白的0．7％;97TGR1、98TGR2和99JI45 TGR2的Southern blotting检测结果显示,GNA基因已插入大豆基因组;（2）遗传学分析,97TRG1的T2代呈孟德尔3：1分离,97TGR2的T3代出现种皮颜色不规则分离。经过抗蚜性鉴定和连续的筛选,获得抗性纯系;（3）抗蚜性鉴定,转基因株的T1、T2世代转基因植株可抑制蚜虫繁殖量50％～90％;（4）品系鉴定,转基因大豆的抗蚜性达到农学标准抗（R）和高抗（HR）水平;大面积环境释放试验自然感蚜鉴定,转基因系蚜虫发生的高峰比对照延迟,高峰期过后群体蚜量的下降速度也比对照快。本研究认为,大豆花粉管通道技术可以利用于大豆的转基因研究和应用中,GNA基因在改良大豆的抗蚜性上是可取的。     

糖皮质激素诱导绿色荧光蛋白在烟草中的表8FBE

糖皮质激素诱导体系具有操作简单、化学物质稳定、可控性好等显著优点,被认为是最有应用潜力的化学诱导体系。利用农杆菌介导方法,将携带诱导表达元件的双元载体pIndex3-NTR-mgfp5转入野生型烟草,转录因子GVG的基因由35S组成型启动子控制表达,绿色荧光蛋白基因mgfp5作为诱导表达的目的基因在诱导启动子的控制下表达。结果表明：绿色荧光蛋白的转录受到诱导剂的严格调控。同时发现,浸根诱导法对基因表达的调控首先表现在新生叶片上,在老叶片中则相对滞后。此外,在质粒构建过程中,在mgfp5基因两端分别加上马铃薯X病毒（PVX）的非翻译区序列5NTR和3NTR,结果非翻译区序列并未抑制绿色荧光蛋白的表达。在建立的糖皮质激素诱导表达体系中,GVG系统对诱导剂具有很高的专一性,并且对基因表达的控制非常严格,几乎没有本底表达,可以从时间、空间及数量上对目的基因进行精确调控。这一体系的建立为今后利用化学诱导的方法进行理论和应用研究奠定了基础。     

沙棘根瘤的解剖学研究

为了解沙棘根瘤的固氮能力，对其进行了形态结构和解剖结构的研究。结果表明：沙棘（Hippophae rhamnoides)的根系发达，具有很强的分蘖能力，而且能和放线菌中的弗兰克氏菌（Frankia)共生，形成根瘤。对根瘤生长、发育及形成的泡囊进行了研究，明确了根瘤的寄生部位和泡囊的固氮情况，并深入研究了Frankia菌的分离培养以及根瘤的侵染过程。     

重组的马铃薯X病毒载体诱导烟草rbcS基因沉默

用重组马铃薯病毒X(potato virus X,PVX)载体侵染烟草植株(Nicotiana benthamiana),该载体带有与RubisCO小亚基(ribulose bisphosphate carboxylase small subunit,rbcS)基因同源的500个核苷酸的cDNA片段。2～3周后,烟草植株出现退绿的rbcS基因沉默的明显症状。利用烟草叶片总RNA,进行Northern杂交检测内源rbcS的表达和病毒复制的情况表明,受病毒侵染的植株内源rbcS基因的表达受到了明显的抑制,而病毒的复制并没有受到影响,重组的病毒载体上与内源基因同源的核苷酸序列诱导了内源rbcS基因的沉默。     

鹿茸角生成过程中的调控因子

鹿茸角是雄鹿(驯鹿除外)一种后天可逐年再生的骨组织。综述了鹿茸角的形成过程一些激素及生长因子调节作用的研究进展。     

番茄茄红素β-环化酶基因高效沉默载体构建

番茄茄红素是番茄果实中含量最多的一种类胡萝卜素,也是植物类胡萝卜素代谢过程中的一个重要中间产物.它的环化是在茄红素β-环化酶(Lyc-b)和茄红素ε-环化酶(Lyc-e)催化下完成的,其中茄红素β-环化酶在番茄茄红素转变为β-胡萝卜素的过程中起主要作用.我们利用RT-PCR方法从番茄叶片中克隆出Lyc-b基因,将PCR产物与pGEM-T载体连接后进行测序,扩增的DNA序列与发表的茄红素β-环化酶序列一致.以此为模板,克隆了400 bp左右的目的片段,利用Gateway系统构建Lyc-b基因目的片段的pJawoh18-2b ihpRNA表达载体.经PCR与酶切鉴定的阳性克隆转化农杆菌LBA1100,利用农杆菌叶盘法转化番茄获得了抗性愈伤及再生苗,以检测ihpRNA沉默载体能否降低茄红素β-环化酶基因表达,并为进一步了解该基因在番茄类胡萝卜素代谢过程中的作用奠定基础.这些数据未在本文列出.     

糖皮质激素诱导绿色荧光蛋白在烟草中的表达

糖皮质激素诱导体系具有操作简单、化学物质稳定、可控性好等显著优点,被认为是最有应用潜力的化学诱导体系.利用农杆菌介导方法,将携带诱导表达元件的双元载体pIndex3-NTR-mgfp5转入野生型烟草,转录因子GVG的基因由35S组成型启动子控制表达,绿色荧光蛋白基因mgfp5作为诱导表达的目的基因在诱导启动子的控制下表达.结果表明:绿色荧光蛋白的转录受到诱导剂的严格调控.同时发现,浸根诱导法对基因表达的调控首先表现在新生叶片上,在老叶片中则相对滞后.此外,在质粒构建过程中,在mgfp5基因两端分别加上马铃薯X病毒(PVX)的非翻译区序列5NTR和3NTR,结果非翻译区序列并未抑制绿色荧光蛋白的表达.在建立的糖皮质激素诱导表达体系中,GVG系统对诱导剂具有很高的专一性,并且对基因表达的控制非常严格,几乎没有本底表达,可以从时间、空间及数量上对目的基因进行精确调控.这一体系的建立为今后利用化学诱导的方法进行理论和应用研究奠定了基础.     

植物转录后基因沉默抑制蛋白研究进展

转录后基因沉默现象广泛存在于植物、动物和真菌中。在植物中转录后基因沉默现象是对外来病毒入侵的一种防御机制。植物病毒既是转录后基因沉默的起始物、靶目标，又是编码抑制转录后基因沉默的蛋白。已经发现3种病毒抑制子作用于转录后基因沉默的不同阶段：烟草蚀刻病毒蛋白（HC-Pro）作用于转录后基因沉默的持续阶段，产生25nt小RNA的上游和产生沉默信号的下游区域；马铃薯x病毒蛋白（P25）和黄瓜花叶病毒蛋白（CMV2b）作用于转录后基因沉默的信号阶段。