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为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。 相似文献
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为快速准确地测定烟草中的蛋白质含量,建立并优化了BCA-TCA法,即提取烟叶蛋白质的最佳体系条件为pH值7.0的0.05 mol/L PBS缓冲液、液料比40 m L/g,使用TCA沉淀蛋白质,利用差减法去除烟叶中还原性物质对BCA方法准确性的影响,从而准确测定样品的蛋白质含量。结果表明:该方法测得的烟叶样品蛋白质含量变异系数小于5%,重复性较好;样品的加标回收率为96.39%,加标回收变异系数为0.75%2%,准确度高;BCA-TCA法和克达尔法测定值的t检验结果为t=1.554 5t_(0.05),8=2.306,说明2种方法在95%的置信区间内无显著差异,但建立的BCATCA法将耗时缩短至2.5~3.5 h,且操作步骤简捷、所用设备简单。可见,建立的BCA-TCA法能够快速准确地测定烟草中的蛋白质含量。 相似文献
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