嗜吞噬细胞无浆体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum),针对GenBank A.phagocytophilum 16S rRNA基因保守序列(JN558815),设计1对引物1-25F/183-205R。以已知引物EE1/EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段(205bp),构建含有16S rRNA基因的重组质粒,以质粒为模板构建了标准曲线。以1-25F/183-205R为荧光定量PCR引物,建立A.phagocytophilum荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测。结果表明,该方法在6.4×10~3~6.4×10~8 copies/μL相关系数为0.99,显示出良好的线性关系;所建方法能特异地检出A.phagocytophilum,对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应;可检测到6.4×10~2 copies/μL的标准质粒DNA,比常规PCR敏感性高100倍;批内及批间变异系数均低于2.0%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16.67%。该研究为A.phagocytophilum临床检测和定量分析病原感染程度奠定理论基础。     

如何使甜玉米获得高产

一、品种选择与种子处理 甜玉米分为普通甜玉米、超甜玉米和加强型甜玉米三大类型,依据生产目的选择对路品种类型.以幼嫩果穗作水果蔬菜上市为主的,选用超甜玉米品种;以做罐头制品为主的,选用普通甜玉米品种.此外,还应注意早、中、晚熟品种搭配种植,陆续上市,从而提高经济效益.目前北方地区种植较多的甜玉米品种主要有沈农甜单一号、甜单8号、津鲜一号、津鲜2号、甜玉2号、甜玉4号、甜玉6号、中甜2号、科甜1 10等一些品种.甜玉米糖分含量高,种子在土壤中易遭地下害虫取食危害,造成缺苗.最好采取催芽播种.精选饱满健壮的种子,先用清水浸泡24h,再用50％多菌灵或75％甲基托布津500倍液浸种2～3h,捞出后清洗干净,控干催芽.     

玉米倒伏的发生与预防措施

一、玉米倒伏的危害玉米倒伏是指玉米在连续降雨或灌水的情况下,土壤含水量达到饱和或过饱和状态。玉米植株吸水量大,重量增加,在风的作用下,发生倾斜、茎折或根倒的现象。分为根倒、弯倒、茎倒。玉米倒伏对产量影响很大,轻度倒伏的地块减产10%～20%,中度倒伏的地块减产30%～40%,严重倒伏的地块减产50%以上,甚至绝收。     

地克珠利防控湖羊自然感染球虫用药程序及效果研究

为探讨地克珠利防控湖羊自然感染球虫的用药技术和效果,90只经粪检确诊为自然感染球虫的50日龄湖羊随机分为8组,其中第1～7组为药物试验组,分别按设计用药程序给予地克珠利,第8组为不用药对照组;应用饱和盐水漂浮法检查用药前后供试羊粪样中球虫卵囊,麦克马斯特法计数每克粪便中的卵囊数,收集阳性样品中球虫卵囊进行培养和鉴定,依用药后不同时期的球虫卵囊减少率、转阴率、平均增重率等判定药物防控球虫效果和增重效益。结果显示:按1 mg·kg~(-1)剂量给予地克珠利,每天1次,连用2 d且间隔14 d再次用药对50日龄湖羊自然感染球虫的防控效果最好;用药后第56天,共4次给予地克珠利的试验羊比对照组羊平均每只多增重2.51 kg,经济效益显著;球虫种类鉴定表明,地克珠利抗小型艾美尔球虫(Eimeria parva)、类绵羊艾美尔球虫(E.ovinoidalis)、阿撒他艾美尔球虫(E.ahsata)、槌形艾美尔球虫(E.crandallis)、颗粒艾美尔球虫(E.granulose)、斑点艾美尔球虫(E.punctata)、苍白艾美尔球虫(E.pallida)、温布里吉艾美尔球虫(E.weybridgensis)的效果良好。本研究结果为羔羊和育肥肉羊球虫病防控提供了技术方法。     

高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶

用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。     

黑龙江省夏大豆高产栽培技术

大豆为一年生草本植物,是重要的油料、食用和饲料作物,是我省分布范围最广、种植面积最大的粮油作物之一.夏大豆栽培因受品种特性、气候条件等因素影响,要实现高产稳产必须根据其生育规律,综合运用调控技术,以为大庆夏大豆生产提供科学依据.     

羊吕氏泰勒虫PCR检测方法的建立与应用

为建立一种准确、敏感的羊吕氏泰勒虫检测方法,根据Gen Bank上发表的羊吕氏泰勒虫18S rRNA基因序列(登录号:KC735166.1),设计1对特异性引物,建立了PCR检测方法。筛选该方法的最佳反应条件及体系,并进行了敏感性、特异性、重复性试验及临床血液样品检测。结果表明,该方法能扩增出大小为962 bp的羊吕氏泰勒虫特异性片段,与GenBank收录的相关参考序列同源性高达99.4%~99.9%;与绵羊泰勒虫、尤氏泰勒虫、环形泰勒虫、莫氏巴贝斯虫和弓形虫基因组DNA均无交叉反应;DNA最低检测量为29.13 fg·μL~(-1);具有良好的重复性;对76份羊临床血液样品检测结果表明,羊吕氏泰勒虫感染率为77.63%,高于已报道的常规PCR检测结果。     

两类推广的Roper-Suffridge算子的性质

讨论两类推广的Roper-Suffridge算子保持双全纯映照子族的性质.从定义出发证明推广的Roper-Suffridge算 子在Cn 中单位球上和复Banach空间单位球上保持强α 次殆星映照及α 次准凸映照的性质,进而得到推广的 Roper-Suffridge算子在Cn 中单位球上和复Hilbert空间单位球上分别保持强星形性和α 次准凸性.     

云南省楚雄州部分地区猪瘟血清学调查

为了解楚雄州部分地区的猪瘟免疫情况,利用酶联免疫法（ELISA）对楚雄市、南华县和禄丰县随机采取的393份血清进行猪瘟抗体检测,并对各县（市）的调查数据加以比较,了解猪瘟在楚雄州部分地区的免疫情况。结果显示,楚雄州部分地区均有较高的猪瘟抗体阳性率,各县（市）的猪瘟抗体阳性率都在80％以上,有的县（市）猪瘟抗体甚至达到了100％。说明楚雄州部分地区的猪瘟免疫效果较好,猪瘟免疫成功。     

类大麦茶风味蒲公英饮料的研究与开发

以蒲公英根为原料,研究开发一款新型的类大麦茶风味蒲公英保健饮料。采用单因素试验确定蒲公英原汁的制备工艺,以白砂糖、柠檬酸、稳定剂等为添加剂进行调配,通过正交试验优化法确定最佳饮料配方;测定蒲公英原汁中的功能成分多糖的含量,并对饮料的品质指标进行评价。结果表明,采用粉碎程度为最粗粉的蒲公英根原料,按料液比1∶30,煎煮1.5h制得蒲公英原汁,此时多糖含量和类大麦茶风味最佳,多糖含量为8.5 mg/100 m L;正交试验优化最佳饮料配方原汁添加量40%,白砂糖添加量8%,柠檬酸添加量0.1%,稳定剂添加量0.1%加水混合,成品汤色棕橙、通透明亮、清香甘甜,富有类大麦茶风味,各项质量指标符合国家标准。