草甘膦人工抗原合成及鼠源多抗血清制备

为检测小分子农药草甘膦(PMG)的残留,本研究合成草甘膦[N-(Phosphonomethyl)glycine PMG]人工抗原,通过免疫制备高敏感性、特异性的鼠源PMG多克隆抗血清;采用EDC法将PMG分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成免疫原PMG-BSA和包被原PMG-OVA;经紫外扫描、SDS-PAGE电泳、质谱鉴定后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清;利用间接ELISA法测定多抗血清效价,竞争ELISA测定多抗血清的敏感性和特异性。结果表明,所合成的免疫抗原效果较好,免疫的4只小鼠效价均达1∶104以上,4号小鼠的多抗血清敏感性最高,半数抑制浓度IC50为31.4μg·m L-1,与其他有机磷类农药无交叉反应,具备良好的特异性。本试验成功合成了PMG人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的鼠源多抗血清,为PMG单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

T-2毒素单抗制备及免疫学检测方法的建立

拟制备灵敏度高、特异性强的抗T-2毒素单克隆抗体,并初步建立T-2毒素阻断ELISA检测方法。采用N,N’-羰基二咪唑(CDI)法合成免疫原T-2-BSA和包被原T-2-OVA,经小鼠免疫、细胞融合、利用ELISA筛选技术筛选出分泌抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用腹腔注射细胞株制备腹水,并进行免疫学特性鉴定,初步建立T-2毒素阻断ELISA检测方法。结果显示,筛选出能稳定分泌抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株命名为4F7,经鉴定该细胞株分泌的单克隆抗体(mAb)效价高达1.024×106,亚型为IgG1型,亲和力常数为1.49×10~(11) mol/L,IC50为2.19μg/L,检测限LOD为0.07μg/L,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA交叉反应率均小于0.01%。样品回收率为83.8%~94.3%,变异系数小于15%。本试验制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的T-2毒素单克隆抗体,并建立了T-2毒素的阻断ELISA快速检测方法,为T-2毒素检测提供了技术支撑。     

环丙氨嗪在畜牧养殖业中的应用及其检测技术研究进展

环丙氨嗪是一种常用的昆虫抑制剂类杀虫剂,对畜禽养殖场的蝇蛆繁殖控制效果显著,在畜牧养殖业中应用广泛。然而长期使用环丙氨嗪易造成细菌耐药性,从而危害动物健康,且会在动物组织中形成药物残留,并通过食物链危害人类健康,甚至危及生命。因此,环丙氨嗪的监控检测对保证食品安全至关重要。综述了环丙氨嗪的性质、应用、危害、检测方法等,并展望了免疫学检测技术在环丙氨嗪监控检测中的应用前景,以期为环丙氨嗪的科学应用及监控检测提供参考。     

T-2毒素完全抗原制备及免疫学检测方法的建立

为建立小分子霉菌毒素中T-2毒素残留的检测方法,合成并鉴定T-2毒素完全抗原,通过制备敏感性强的抗T-2毒素多抗血清,建立T-2毒素免疫学检测方法。采用N,N'-羰基二咪唑(CDI)法合成完全抗原T-2-BSA和包被原T-2-OVA,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和动物免疫试验对合成的完全抗原进行鉴定,优化ELISA反应条件,建立T-2毒素间接竞争ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,完全抗原T-2-BSA合成成功;动物试验结果显示,制备的完全抗原能够刺激小鼠产生针对T-2毒素的特异性抗体;基于该抗体所建立的T-2毒素间接竞争ELISA检测方法的灵敏度(IC50)为8.34 ng/m L,检测限(LOD)为0.048 ng/m L。综上,成功合成了完全抗原T-2-BSA,获得了效价高、敏感性强的抗T-2毒素的鼠源多克隆抗体,并初步建立了T-2毒素免疫学检测方法。     

基于结构类似物的交叉反应性制备高灵敏度 玉米赤霉醇单克隆抗体

【目的】获取高灵敏度的玉米赤霉醇（zearalanol,ZAL）单克隆抗体,为提高玉米赤霉醇免疫学检测方法灵敏度研究奠定基础。【方法】利用ZAL的结构类似物玉米赤霉酮（zearalanone, ZAN）制备人工完全抗原。肟化改造ZAN得到ZAN-O;碳二亚胺（EDC）法把ZAN-O分别连接到牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上制备出ZAN-O-BSA和ZAN-O-OVA。ZAN-O-BSA免疫小鼠,免疫剂量为50 μg蛋白/只鼠。选取血清效价高、灵敏度好的小鼠进行细胞融合。阳性杂交瘤筛选过程中,利用ZAL替代ZAN作为阻断剂,筛选能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞。体内诱生腹水法来批量制备ZAL单抗,并对单抗的免疫学性能进行了鉴定。【结果】通过细胞融合,阳性杂交瘤筛选得到了1株能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为12B10A7,其分泌的ZAL单抗灵敏度(半数抑制浓度, IC₅₀)为577 pg?mL ^-1,亲和力常数Ka=6.21×10 ⁷L?mol ^-1,与结构类似物β-玉米赤霉醇（β-zearalanol, β-ZAL）、α-玉米赤霉烯醇（α-zearalenol, α-ZEL）、β-玉米赤霉烯醇（β-zearalenol, β-ZEL）、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEN）分别有43.06%、15.51%、15.22%、77.65%及9.79%的交叉反应率,而与其他霉菌毒素及载体蛋白交叉反应率均<0.06%。【结论】基于抗体交叉反应特性,利用ZAN制备人工抗原,得到了ZAL的单克隆抗体,所制备的单克隆抗体亲和力高,灵敏度好,特异性强。     

土地流转背景下的农民权益保障问题研究

随着土地流转政策在全国各地的相继实施,各种土地流转发展模式不断涌现,但隐藏在不同发展模式下的农民问题却未得到根本的解决。因土地流转引发的农民利益保障、就业保障、生活保障问题不断成为社会关注的焦点,关系着现代农业的发展及社会主义新农村建设。对此,从农民利益诉求、土地产权制度、土地流转市场、劳动力转移、社会保障体系等角度出发,为保障农民的基本权益提供合理化建议。     

社交媒体促进青年返乡创业意愿调查——基于自我效能感的理论模型

社交媒体的普及为青年提供了了解农村环境和生活的途径,增加了创业选择与模式。为发挥社交媒体在毕业生回乡创业中的作用,调研了在校青年和即将毕业的大四应届生,综合相关文献,考虑社会支持、个人特征、平台特征和创业能力经验四个因素,以自我效能感为中介变量建立模型,研究社交媒体对青年返乡创业意愿的影响。结果表明,信息支持和情感支持对自我效能感有正向影响;新媒体的知识获取能力和认知水平对自我效能感有正向影响;新媒体的可接触性对自我效能感有正向影响;创业经验和能力对自我效能感有正向影响;自我效能感对回乡创业动机有正向影响。     

玉米赤霉醇完全抗原的制备及质量鉴定

旨在合成玉米赤霉醇(ZER)人工抗原,并用其免疫小鼠以获得含高滴度ZER多克隆抗体的小鼠血清,为ZER单克隆抗体的制备奠定基础。改造ZER第16位上的羟基,合成半抗原ZER-16-羧丙基丁醚,然后分别采用混合酸酐法和碳二亚胺(EDC)法将改造后的半抗原与载体蛋白BSA或OVA偶联,制备免疫原ZER-BSA和包被原ZER-OVA,并采用凝胶电泳、动物免疫对人工抗原进行质量鉴定,间接ELISA测定抗血清效价,间接竞争(阻断)ELISA测定抗血清的敏感性和特异性。结果表明,用制备的免疫原免疫小鼠血清效价均已达到1∶104以上。6号鼠的血清敏感性最高,对ZER的半数抑制质量浓度(IC50)达15.77ng/mL,获得的血清除与α-玉米赤霉醇特异性反应外,与其结构类似物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮分别有12.5%、100%、12.5%、25%、100%的交叉反应,与其他霉菌毒素交叉反应性均小于0.5%。表明试验成功获得ZER人工抗原,通过动物免疫制备敏感性好、特异性强的ZER多克隆抗体,为ZER单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。     

基于旅游空间互动模型的环巢湖乡村旅游网络中心性分析

乡村旅游是乡村振兴与"双循环"背景下脱贫攻坚、推进乡村振兴和扩大内需的重要路径之一，而乡村旅游事业的发展离不开乡村旅游空间网络的构建，对其分析可为乡村旅游空间结构的优化提供实践指导和理论依据。环巢湖十二个乡镇的旅游空间互动模型网络中心性分析显示，环巢湖乡村旅游发展整体处于中等水平，三河镇构成较为突出的一极，乡村旅游发展初具规模，旅游进一步发展潜力大；旅游特征向量中心性值未出现较大变化，说明核心节点的辐射作用不足；旅游网络系统尚未健全，中心节点数量偏少，密度较低，有效连接性差。建议从空间结构上对环巢湖乡村旅游进行优化。