叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性

根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01,设计特异性引物,将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149,利用基因枪轰击法转化烟草,经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Southern结果显示外源基因已整合至烟草叶绿体基因组中但同质化水平不高,RT-PCR结果也表明昆虫抗冻蛋白基因已发生了转录。将野生型烟草、叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草及核转化T₁代转抗冻蛋白基因烟草(pCAMBIA1302- MpAFP149)于–1℃低温处理3 d,观察耐寒表型及测定相对电导率。结果表明, 叶绿体型转基因烟草的耐寒表型优于野生型烟草,但与核转化的T₁代转抗冻蛋白基因烟草无显著差异。处理3 d时,叶绿体型转基因烟草和T₁代转抗冻蛋白基因烟草的电导率分别为39.2%和38.2%,而野生型烟草已达73.7%。本实验获得的异质化转叶绿体抗冻蛋白基因烟草与转核基因烟草的耐寒力无差异。     

中国龙虾食物变态反应BALB/c鼠模型的建立（英文）

[目的]通过腹腔注射的致敏方式建立中国龙虾食物变态反应Balb/c小鼠模型,探讨中国龙虾食物变态反应体外鉴定与评价方法。[方法]将40只雄性Balb/c小鼠分为卵清蛋白（OVA）阳性对照组、Coca’s液阴性对照组、空白对照组和模型组,以OVA、中国龙虾粗提蛋白,加氢氧化铝佐剂腹腔注射免疫Balb/c小鼠,建立食物变态反应小鼠模型。ELISA法测定第二次致敏激发后血清中IgE与组胺水平并进行被动皮肤过敏试验（PCA）确定特异性IgE抗体滴度,同时观察脾指数、小肠组织学变化及激发后的食物变态反应症状。[结果]末次激发后1 h采血,中国龙虾粗提蛋白组血清IgE含量为236.75（±73.39）μg/L,与阳性对照OVA组无区别,与阴性对照Coca’s液组和正常对照组相比显著升高（P〈0.01）;中国龙虾粗提蛋白组的组胺含量406.55（±232.79）μg/L与正常对照组相比显著升高（P〈0.01）;PCA反应中国龙虾粗提蛋白组血清特异性IgE抗体滴度达到1/16;中国龙虾粗提蛋白组和OVA致敏组小鼠脾指数明显大于Coca’s液或正常对照组（P〈0.01）且前两组小肠粘膜固有层皆出现淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润。[结论]建立了一种中国龙虾食物变态反应小鼠模型,通过ELISA测定血清IgE和组胺以及PCA确定特异性IgE抗体滴度可作为一种鉴定与评价中国龙虾食物变态反应的方法。     

家兔流行性真茵感染的诊治

家兔表皮真菌感染俗称皮癣,主要由毛癣菌感染引起,可在人兽之间传播.在兔群中时有发现,但以散发为主,不易引起重视.以气溶胶、被毛、真菌孢子、菌丝体随风飘移传播和接触感染为主.多发于晚春和夏季,较长时间的湿热气侯有利于本病的发生.对肉兔和皮用兔的经济价值有较大影响,更不能用于教学和科学实验.本文仅对赣州某兔场发生的一起较大规模流行的真菌感染作一初步报告.     

光滑鳖甲Anatolica polita 抗冻蛋白基因的发育阶段性表达以及低温对其表达的影响

[目的]光滑鳖甲是广泛分布于新疆荒漠地区的一种拟步甲科(Tenebrionidae)昆虫,它能够通过抗冻蛋白的表达从而在长时间低温和剧烈的温度变化等环境条件下生存.研究光滑鳖甲抗冻蛋白基因(Apafp)在不同发育阶段表达差异和冷胁迫对其表达的影响.[方法]通过实时定量PCR方法对Apafp752和Apafp914两种抗冻蛋白基因的mRNA水平变化规律进行了研究.[结果]随着幼虫龄期的增大,Apafps mRNA水平逐渐增加,至8～9龄幼虫阶段达到最高约为小龄幼虫的7～8倍,蛹期时则显著降低.血淋巴液的渗透浓度值也呈现相同趋势.[结论]发育阶段的变化是对光滑鳖甲抗冻蛋白基因表达的重要调节因素.在低温胁迫下4～6龄幼虫afps的表达显著提高,说明冷胁迫能促进幼虫afps的累积.结合Apafps基因表达和低温存活率可以推测光滑鳖甲大龄幼虫可能是一种过冬虫态.     

兔球虫和兔线虫混合感染的诊治

１发病情况某学院实验动物室曾在１９９５年流行过“兔瘟”,兔球虫病也时有发生,但从未引起大批量死亡。该室饲养防疫条件较差,又常从农村养兔户和其它兔场不经检疫引进兔子。青饲料向市场收购,饲喂前不清洗。这些因素造成了病原体的繁殖和传播。１９９６年１２月下旬...     

家兔流行性真菌感染的诊治

家兔表皮真菌感染俗称皮癣,主要由毛癣菌感染引起,可在人兽之间传播。在兔群中时有发现,但以散发为主,不易引起重视。以气溶胶、被毛、真菌孢子、菌丝体随风飘移传播和接触感染为主。多发于晚春和夏季,较长时间的湿热气侯有利于本病的发生。对肉兔和皮用兔的经济价值有较大影响,更不能用于教学和科学实验。本文仅对赣州某兔场发生的一起较大规模流行的真菌感染作一初步报告。1发病情况赣州某兔场于2005年4月底发现有家兔秃毛情况,只是进行个别治疗,而未采取综合措施,造成病兔此起彼伏,先后有32只家兔感染。临床表现为在头部、耳根、颈部、背…     

信鸽感染禽霍乱的诊治

１９９９年１１月一 信鸽群１３０多羽突发 疫情。根据病因分析、 临床症状、病理剖检 和微生物学诊断，确 诊为食霍乱感染。现 将诊治情况介绍如 下： １发病情况１９９９ 年１１月初该信鸽群从 外引进一雄种鸽而引 发疾病，前后共死亡 ３１羽。疫初请了当地 的兽医诊治，认为是 新城疫感染，经一周 防治无效，陆续死亡 ２５羽。尚有１１羽有不 同程度临床症状的患 鸽。后根据其临床症 状和病鸽剖检，初步认为是禽霍乱感染，并按禽霍乱防治方案处理，经一周，５羽症状严重者死亡，另６羽轻度患鸽治愈，疫情得以完全控制，无新的病例出现。…     

花粉管介导的准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白转基因棉花的筛选

利用新疆荒漠昆虫抗冻蛋白基因进行遗传转化是培育新疆棉花抗寒品种的新途径. 研究采用RT-PCR结合RACE技术从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲(Microdera puntip ennis dzungarica)中克隆获得抗冻蛋白(Antifreeze protein)基因Mp AFP149.将MpAFP149克隆至 pBI121上,获得重组质粒后采用电转化法将重组质粒转入农杆菌EHA105内,PCR筛选鉴定重组子,并测序确定抗冻蛋白植物表达载体构建正确.将pBI121-MpAFP通过田间的花粉管导入技术转化棉花,收取转化的棉花种子,经检测证明在转化10 000朵花中,卡那霉素抗性筛选出 13株,PCR检测有2株阳性植株.实验结果为进一步开展抗冻蛋白基因转化棉花的研究奠定了基础.     

昆虫抗冻蛋白基因转化烟草的抗寒性

将准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因MPAFP149亚克隆至pCAMBIA1302中,构建成单价植物表达载体pCAMBIA1302-MPAFP149,转化至农杆菌EHA105中,利用叶圆盘法转化烟草。通过PCR、PCR-Southern及RT-PCR检测表明抗冻蛋白基因已整合至烟草基因组中,并发生了转录。对T0代转基因烟草以－1℃处理48 h,转基因烟草的相对电导率和表型明显优于野生型烟草。室温恢复试验验证转基因烟草可存活并恢复生长,而野生型烟草受到了不可逆的低温冻害。研究证明转化后携带昆虫抗冻蛋白基因的烟草比野生型烟草具有明显的抗寒能力,该结果为减轻冷敏感经济作物在春季遭受霜害提供了理论依据和应用基础。