家蚕非绢丝用途产品开发综合摘报

家蚕主产品是蚕丝及丝绸制品 ,除此之外 ,非绢丝用途的产品在蚕丝业的地位逐渐重要起来。利用家蚕和桑的营养保健功能 ,经过我们多年开发研究 ,形成了桑蚕非绢丝产业的系列产品 ,有家蚕基因工程植酸酶、低尿酸盐全蚕粉、系列桑茶、蚕蛹红景天胶囊、蚕蛹人参胶囊、雄蛾胶囊、蛹虫草等 ,为家蚕的综合利用开辟了一条新路。     

枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA突变文库构建及其生物柴油转酯研究

采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯（pNPP）法进行96孔板高通量筛选。结果表明：第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn2+浓度为0.2 mmol·L-1时,产生了突变菌株。对该条件下构建的文库中124株突变菌株进行pNPP高通量筛选,突变株4B2的吸光度值A405为1.395,与未突变株PET32a lipaseA（A405=0.448）差异显著。测序结果表明,突变株4B2脂肪酶基因lipaseA有5个核苷酸位点发生了突变,其中3个是同义突变,2个是错义突变,分别是82位的天冬酰胺（AAU）突变为酪氨酸（UAU）,143位的赖氨酸（AAG）突变为苏氨酸（ACG）。突变株4B2发酵上清液转化生物柴油的转酯效率较对照菌PET 32a lipaseA有明显提高,前者为79.5%,后者为49.72%。本研究为枯草芽孢杆菌脂肪酶lipaseA转酯活性位点的探索奠定了基础。     

ELISA检测蜂王浆氯霉素残留的快速前处理方法

为获得一种能快速检测蜂王浆中氯霉素残留的前处理方法,采用改良的0.1mol/L Tris-TBE(pH=8.0)溶液处理蜂王浆,结合乙酸乙酯提取氯霉素(CAP),处理时间约25min。ELISA检测样品的OD450值明显低于试剂盒法,通过添加标准CAP溶液对改良法进行验证。结果表明,改良法提取的样品对不同CAP质量浓度表现出明显的OD450值变化,与添加前比较差异显著(P<0.05),排除处理过程存在干扰显色的因素。改良法检测相同样品的平均相对标准偏差为1.29%,完全符合目前国际上氯霉素残留检测的要求。     

油菜柠檬酸合酶基因的克隆及在逆境下的表达

柠檬酸合酶是植物多种代谢途径的限速酶, 及代谢变化的标志酶。为了解油菜柠檬酸合酶基因的生理功能, 以甘蓝型油菜叶片cDNA为模板, 设计特异性引物, 获得一编码柠檬酸合酶基因的cDNA序列, 全长1 659 bp, ORF区含476个氨基酸残基, 序列比对显示其蛋白序列与拟南芥有较高的同源性(96.0%), 氨基末端含一线粒体靶信号。聚类分析表明, 油菜柠檬酸合酶基因与其他植物内该基因高度同源。对油菜幼苗进行植物生长调节物质、高温和低温、强光照和弱光照、盐、菌核病、干旱和水渍等处理, 采用半定量PCR法对油菜叶片柠檬酸合酶基因的表达模式进行检测, 发现在盐胁迫、暗光和强光的处理下, 柠檬酸合酶基因的表达基本没有变化;在水渍、干旱、IAA和6-BA胁迫下, 其表达有所升高, 但出现峰值的时间不同, ABA对表达模式的影响与IAA相反;感染菌核病后其表达降低;对GA₃的应答呈鞍型。对部分处理采用荧光定量PCR验证, 其结果与半定量PCR结果基本一致。