春尺蠖新病毒株的鉴定及其对春尺蠖核型多角体病毒的增效作用

春尺蠖在我国危害严重，为了挖掘具有开发潜力和应用前景的生防因子，本文分离纯化一株能够感染春尺蠖幼虫的新病毒，生物活性测定了新病毒株的毒力及其对春尺蠖核型多角体病毒（ApciNPV）的增效作用。新病毒株的超微结构观察表明，该病毒多角体多为切面呈六边形的多面体，直径大小为0.32～1.20 μm，病毒粒子呈近球状，具有质型多角体病毒的结构特征，命名为春尺蠖质型多角体病毒（ApciCPV）。生物活性测定结果显示，ApciCPV对春尺蠖3龄幼虫有很强的毒力，半致死浓度（LC₅₀）为1.42×10⁴ OBs/mL。当感染春尺蠖3龄幼虫时，ApciCPV可使ApciNPV半致死时间（LT₅₀）缩短0.50～10.90 d，使ApciNPV对春尺蠖的最终致死率提高6.70%～43.33%。根据最终致死率、LT₅₀以及ST三个值综合决定，当ApciNPV和ApciCPV配比浓度分别为1.0×10⁶和1.0×10⁴ OBs/mL时，对春尺蠖3龄幼虫的感染效率最高。新分离的ApciCPV病毒株是控制春尺蠖虫口密度的理想生物因子。     

美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化

[目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。     

伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌对松材线虫的联合毒力研究

[目的]探究伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对松材线虫的联合毒力。[方法]使用Esteya vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液处理松材线虫,通过线虫的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定E.vermicola与Bt联合对松材线虫的影响。[结果]经过E.vermicola孢子悬浮液处理过的线虫会出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的E.vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液联合处理松材线虫可以明显地提高线虫的死亡率,最高可以达到100%;联合处理的线虫死亡速度较快,随着处理时间的延长,死亡率会一直呈上升的趋势。[结论]应用这两种生防微生物在合适的浓度下混配能够在较短时间内提高松材线虫的死亡率。     

矮生菜豆——张研1号

<正> 张研1号矮生菜豆,是我所科研人员通过引种观察、鉴定和田间选育,筛选出的适合张家口地区及北京、河北省等地种植的高产、早熟、抗病矮生菜豆新品种。1990年通过鉴定,并在张家口地区各市、县及北京市昌平县等地示范及大面积推广。特征特性张研1号菜豆,一般株高40—45厘米,茎下部淡浅紫红色,上部绿色,叶浅绿色,花浅紫红色,分     

具杀松材线虫活性的苏云金芽胞杆菌筛选及其毒力测定

松材线虫是松树萎蔫病的主要病原,为了筛选到具有较高杀线虫活性的苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis菌株,采用直接触杀法对苏云金芽胞杆菌发酵液进行杀线虫活性以及稳定性的检测,并对筛选出的高活性菌株通过扩增16S rDNA片段进行菌株的鉴定。结果表明,4个菌株中具有最高活性的菌株D发酵液处理松材线虫8 h的死亡率超过70%,24 h其死亡率达到100%;在温度为-20、25、40、60、80和121℃条件下处理的菌株D发酵液,其对松材线虫的毒力都在85%以上;在pH 5.0~10.0时,菌株D发酵液对松材线虫的毒力都在85%~94%,并无显著的差异;将菌株D发酵液进行蛋白酶K处理后,其对松材线虫的毒力仍在98%以上;在4℃环境下保存50 d,菌株D发酵液的毒力没有明显下降。通过16S rDNA 1.5 kb片段的序列分析,初步得出菌株D可能是苏云金芽胞杆菌KNU-07。可见,菌株D发酵液具有耐热、耐储藏和对蛋白酶K稳定的特性,是一株具有开发潜力和应用前景的高毒力菌株。