一例樱桃谷雏鸭大肠杆菌病的诊断

2007年11月初,山东省利津县某养鸭场饲养的8000只樱桃谷鸭雏鸭发生以排白色或绿色稀便,发病急,死亡率高为主要特点的疾病。经现场调查,根据临床症状、解剖变化和实验室检查,诊断为鸭大肠杆菌病。现将诊断情况报告如下:     

猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立

目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。     

布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立

应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。     

18种中药水煎剂及其提取物浓缩粉对貂源肺炎克雷伯菌的体外抑菌作用研究

为研究连翘、白头翁、丹皮等18种中药水煎剂及其提取物浓缩粉对貂源肺炎克雷伯菌的抑菌作用,试验采用琼脂平板打孔法测定抑菌圈直径观察药物的体外抑菌作用。结果表明:中药水煎剂中,黄连、黄芩和薄荷对肺炎克雷伯分离株的抑菌效果最好,抑菌圈直径达10 mm以上,属于中度敏感。中药提取物浓缩粉中,丹皮酚对肺炎克雷菌的抑制作用最强,达到高度敏感。黄连、连翘、山豆根、白芍、薄荷和黄芪多糖6种中药提取物浓缩粉对肺炎克雷伯菌也具有较强的抑菌作用,抑菌圈直径达10 mm以上,属于中度敏感。说明18种中药水煎剂及其提取物浓缩粉对肺炎克雷伯菌有不同程度抑菌作用。     

我国局部猪胸膜肺炎流行调查和血清型分析

为了解我国猪传染性胸膜肺炎的流行情况及其病原胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleurnopneumoniae,简称APP)的主要血清型,1990年~2014年我们对我国23省市不同养猪场进行了流行病学调查。调查结果表明,该病在我国23个省市均有发生,先后从山东、深圳、上海、河北、江苏、河南等省、市的临床病例和送检病料中分离到APP病原62株。其中已鉴定、定型的菌株59株,所涉及的型株为1型4株、2型11株、3型3株、5型18株、7型19株、8型1株、未定型3株。根据我们对全国流行病学调查和病原分离鉴定各型分离株的多少及其毒力的强弱比较分析,本病危害我国养猪业发展的主要血清型为7型、5型和1型。     

禽流感H5亚型油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用禽流感H5N2亚型毒株接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活后与优质矿物油佐荆混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批，接种28日龄非免疫鸡100羽，4天后检测抗体，以后每隔1周或2周采血检测H5亚型HI抗体，并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明，免疫后4天即能检测出抗体，之后逐渐上升，至第5周抗体水平达到高峰且较稳定，然后缓慢下降，110天后抗体降至临界值以下。攻毒结果表明，能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。     

猪瘟兔化组织灭活疫苗的研制

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的重要的急性、烈性传染病，它被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病之一。每年我国都投入大量的人力、物力、财力进行猪瘟疫病的研究及控制工作，但近年来猪瘟仍有发生，且有增强的趋势。至今尚无特效的药物和治疗方法，疫苗预防仍是我国防治猪瘟的主要手段。我国目前市场上多为活疫苗，但因其免疫期短、离散性大等缺点，所以我们着手对猪瘟兔化弱毒灭活疫苗的研制工作，经过2年的努力，做了大量的实验，终于研制出猪瘟灭活疫苗，其安全性好、无副作用、易吸收、免疫力强、产生抗体快速、稳定而持久。     

禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(LPAI-H5N2)株HA全基因克隆与序列分析

为进一步分析禽流感病毒(AIV)H5N2分离株血凝素(HA)基因的特性,参照已发表H5亚型禽流感HA基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR技术,以禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(D96)RNA为模板,扩增了HA全基因并进行核苷酸同源性比较,氨基酸编码分析,绘制系统发育进化树。结果表明,扩增片段长1737个核苷酸,包含了完整的HA基因的开放阅读框架,与Genbank已发表的H5N1和H5N2分离株的HA基因序列比较,发现与国内H5N1分离株同源性较低,只有80%左右,而与H5N2各株序列具有很高的同源性,最高达97.5%,印证了AIV基因组8个片段间频繁的重组及AIV高变异性的特点。推导的氨基酸序列分析表明,HA蛋白裂解位点上游丢失了4个连续碱性氨基酸(R-R-R-K),裂解位点处氨基酸序列为E-T-R,仅包含一个碱性氨基酸(R-)残基,符合低致病性毒株的特征,证明为低致病性毒株。其HA推导后氨基酸序列与H5N1AIV的同源性接近90%,以其研究的疫苗,可以有效抵御我国流行的H5亚型AIV病毒的感染,同时因为是弱毒株,以其研制的疫苗具有更好的安全性,也更符合公共卫生学的要求。     

猪瘟灭活疫苗抗体消长规律动态研究

本试验采用IHA试验方法,对经猪瘟灭活疫苗免疫的猪抗体产生的水平进行了监测,并对仔猪母源抗体的消长规律进行了研究.结果表明仔猪母源抗体水平与母猪抗体水平呈正相关,其首次免疫抗体增长幅度与母源抗体呈负相关,但其抗体水平与免疫次数呈正相关.主要免疫的抗体效价与免疫剂量呈正相关,而与首免日龄无关.攻毒结果表明:当IHA＜6log2时,仅能抗死亡;当IHA≥7log2时,可抗感染.     

鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及药敏试验

从云南、山东16个鸭场有典型浆膜炎临床症状的病(死)鸭中分离到14株细菌,经形态、培养特性、生化特性、PCR等生物学特性鉴定,上述菌株均为鸭疫里默氏杆菌,型鉴定试验表明其中2株为RA-1型、4株为RA-2型,药敏试验表明山东分离株对头孢氨苄、痢特灵、链霉素、庆大霉素较敏感,云南分离株对氨苄青霉素、痢特灵、头孢氨苄较敏感。动物致病性试验显示RA-1、RA-1型分离菌株均可使健康鸭发病或死亡。