不同生长时期凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病的检出与病原鉴定

随着集约化生产、养殖环境恶化,急性肝胰腺坏死病(AHPND)成为了当前制约对虾养殖效益的主要疾病之一。本试验以凡纳滨对虾不同生长时期的亲虾、虾苗、成虾作为研究对象,将对虾的肝胰腺进行初步富集后,采用荧光PCR和普通PCR的方法,检测样品中pirA^VP和pirB^VP毒素基因;对虾苗AHPND的病原进行分离鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,在116份样品中检测到亲虾AHPND阳性3份,虾苗AHPND阳性7份,成虾AHPND阳性9份;从虾苗AHPND样品中分离纯化获得1株弧菌,经生化鉴定为副溶血性弧菌;16S rRNA系统发育树分析显示,该分离株与副溶血性弧菌聚为一类。药敏试验结果显示,该分离株对头孢西叮、头孢呋辛、复方新诺明等11种抗菌药敏感,对头孢噻吩耐药,对阿米卡星中介。动物致病性试验结果显示,健康凡纳滨对虾浸染1.8×10⁸ CFU/mL浓度的副溶血性弧菌菌液后,24 h内全部死亡,对虾的肝胰腺小管上皮细胞出现萎缩、变性、坏死等特征。本试验进一步掌握目前粤西地区不同生长时期凡纳滨对虾中AHPND的流行病学数据和...     

基于环境DNA的进口凡纳滨对虾携带水传播虾肝肠胞虫风险评估

【目的】基于环境DNA（eDNA）分析进口凡纳滨对虾携带水传播和运输虾肝肠胞虫（EHP）的风险性,为环境水中疫病监测和风险评估提供参考依据。【方法】取60批进口亲虾携带水用0.45 μm硝酸纤维素膜过滤并提取eDNA,挑取10个携带水样滤膜eDNA用于凡纳滨对虾物种特异性鉴定,采用实时荧光定量PCR对所有携带水样滤膜进行EHP检测;同时以EHP阳性进口亲虾携带水开展人工感染试验,感染10 d后分别取养殖水样及虾体进行EHP检测;对进口亲虾携带水EHP阳性滤膜进行宏基因组测序分析,采用Krona对物种注释结果进行可视化展示,并将宏基因组测序分析结果与NCBI已公布的EHP氨基酸序列进行BLAST比对分析。【结果】进口亲虾携带水检测结果显示,成功从10个携带水滤膜eDNA扩增出凡纳滨对虾347 bp的特异目的片段,与原始序列片段的相似性达100%;在60批进口亲虾携带水样品中有2批携带水呈EHP阳性。EHP阳性进口亲虾携带水能成功感染虾苗组,且在虾苗肝胰腺组织分离获得成熟的EHP孢子,但亲虾组的虾体EHP检测呈阴性。宏基因组测序得到EHP的物种相对丰度值占真核动物物种的0.7%;与NCBI已公布的EHP氨基酸序列进行BLAST比对,结果获得213个同源EHP氨基酸序列;从进口亲虾携带水样品中分离鉴定获得的EHP与已报道物种黄道蟹肠孢虫（Enterospora canceri）和毕氏肠胞虫（Enterocytozoon bieneusi）的亲缘关系较近,对应的氨基酸序列相似性为别为83%和81%。【结论】进口凡纳滨对虾亲虾携带水具有传播EHP的可能性,即仅针对亲虾虾体进行EHP检测具有不完全性。eDNA检测可用来补充传统的虾体疫病监测方法,作为水环境疫病检测和风险评估的重要手段。     

环境DNA应用研究进展

近年来,环境DNA（eDNA）应用发展迅速,已涉及食品微生物、生物监测、群落生态学、古环境研究、保护生物学和入侵生态学等多个领域。基于eDNA的研究手段具有非侵入性、易于取样和能够探测隐秘物种等优点,因此eDNA是生态系统广泛直接取样的一种有吸引力的替代品。本文综述了eDNA的定义和发展历史,介绍了DNA条形码选择和设计、样品收集、DNA抽提、DNA扩增测序、DNA条形码数据分析等eDNA研究步骤,描述了eDNA在外来物种入侵、物种检测、生物量估算、水中生态系统监测等领域的应用,总结出eDNA研究中存在的问题,并展望该方法的应用前景。本文为全面了解eDNA的应用提供了参考。     

不同品种的英系猪繁殖性能的测定比较

为了解英系大白猪、长白猪、杜洛克猪纯种繁育繁殖性能上的特点和差异,通过统计分析广州某种猪场2016—2018年的育种数据,发现三个品种间的长白猪的产仔窝数和窝产仔数最高;大白猪的产活仔数最高,杜洛克猪和大白猪的产活仔率持平;但是三个品种的产仔窝数、总产仔数、产活仔数的差异不显著(P 0.05),三个品种的配种受胎率差异不大;同时发现近三年的三个品系母猪的繁殖性能总体呈上升的趋势。文章旨在分析英系3个品种猪纯种繁殖性能方面的差异,为猪场生产和繁殖育种提供科学数据。     

猪链球菌相关毒力因子研究进展

猪链球菌(Streptococcus suis)病是近年来严重危害我国养猪业发展的细菌性传染病。由于没有国际统一的用于猪链球菌感染的动物模型,即便是同一菌株,其毒力在不同文献中也会存在较大差异。本文对猪链球菌相关致病因子及其研究进展进行综述,进而对猪链球菌相关毒力因子有新的认识。     

禽养殖场禽流感发生率影响因子研究进展

近年来,禽流感受到全球高度关注,禽类为流感病毒的基因贮存库,禽养殖场发生禽流感将产生极大的社会负面影响。综述养殖过程中养殖场禽流感发生率的影响因子,包括养殖前期的选址、水源情况、养殖分区,初孵雏或种蛋的选择,养殖过程中的养殖品种、养殖密度、卫生消毒、人员管理、免疫接种等。就我国目前而言,导致风险的主要原因是农户认知水平低和政府相关政策的不完善,国家宏观调控措施的施行可有效降低禽流感发病率。     

表观健康的猪肉携带猪链球菌的调查

猪链球菌病(SS)是由猪链球菌引起的人兽共患传染性疾病,给养猪业及公共卫生安全构成了严重的威胁.人和猪感染发病的临床症状相似.以往对猪肉进行食品安全检测的项目多集中在致泻大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌等食源性病原菌,检测过程中,偶尔也能分离到链球菌,但多数是没有致病性的[1-2].在经济高度发达的时代,食品安全越来越成为人们关注的焦点,本次通过对广州大型农贸市场销售的屠宰猪肉的随机抽样,初步了解表观健康的猪肉携带猪链球菌的情况和耐药性情况,为防范食源性猪链球菌病感染人及耐药性的传播提供理论依据.     

进口南美白对虾亲虾急性肝胰腺坏死病的检测分析

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种新发疫病,对对虾养殖业损失巨大。其病原是携带毒素质粒基因的副溶血弧菌,但具体致病机制仍不清楚。本研究利用国外报道的毒素质粒基因特异性引物,对一批进境南美白对虾亲虾进行了AHPND检测。因其PCR的扩增结果与国外所报道的基因片段一致,初步认定为AHPND阳性。本文对此次检测的结果和过程进行了分析,为我国AHPND的检测提供了分析数据。     

传染性皮下及造血器官坏死病毒诱导南美白对虾抗白斑综合征病毒感染的初步研究

为进一步研究对虾抗病毒免疫方法,使用实验室动物病毒感染死亡率分析,研究传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)和白斑综合征病毒(WSSV)在感染南美白对虾后的相互作用机制。结果显示,预感染IHHNV后的对虾在进行WSSV攻毒后,对虾的存活率得到了提高。荧光PCR检测病毒量的结果显示,预感染IHHNV再用WSSV攻毒,存活虾体内的IHHNV含量比死亡虾高。研究结果初步证明,IHHNV和WSSV在对虾体内存在相互作用机制,且IHHNV具有抑制WSSV复制的作用。     

虾肝肠胞虫Taqman荧光PCR方法的建立与应用

为给虾肝肠胞虫(EHP)的监测和控制工作提供特异、灵敏的快速检测方法,针对EHP 18S相关保守序列设计1对特异性引物,优化并建立EHP的Taqman荧光PCR检测方法,同时验证该方法的重复性和敏感性。结果显示:体系扩增的最佳退火温度为60℃,构建好的质粒标准品标准曲线斜率为-3.195,R2为0.991;扩增产物阈值循环数(Ct)与标准模板起始量(X)的关系曲线为-3.195×Log(X)+36.923,扩增效率为105.59。使用所构建方法检测湛江市EHP流行情况,同时对样品进行白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、桃拉综合征病毒(TSV)、早期死亡综合症(AHPND)病毒检测。结果显示:样品的WSSV、IHHNV、TSV检测均为阴性;AHPND检出阳性率为10%,EHP为30%,其中1份样品的EHP和AHPND检测同为阳性。本研究建立的EHP荧光PCR方法具有特异、灵敏等优点。该方法及其临床应用数据可为EHP的防控提供技术参考。