表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定

分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。     

兔出血症病毒VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析

本实验用RHDV CD株人工感染家兔,发病死亡后,取肝脏匀浆,用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物,采用RT—PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后,进行序列测定。测序结果表明,VP60主要抗原表位基因长525bp。该序列与已发表的其它13株RHDV VP60同一核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性比较。结果显示,CD株核酸序列与WX-84株同源性最高为97.5%,与其它毒株的同源性在92.0%~96.6%之间。氨基酸序列与WX-84株、墨西哥Mexico-89株同源性最高为99.4%,与其它毒株的同源性在96.6%~98.3%之间。     

牛肉中沙门氏菌的检测

对95份牛肉样品进行沙门氏菌实验室检测,通过增菌、选择性分离培养及生化试验、血清学鉴定等检验,结果3份样品检出沙门氏菌,检出阳性率为3.15%。     

PRRSV辽宁分离株ORF3基因的克隆与序列分析

以辽宁地区某猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病料为材料,采用RT-PCR方法特异性扩增编码猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3蛋白的ORF3基因全长cDNA,结果该分离株ORF3基因cDNA编码区长765bp,可编码254个氨基酸残基,与美洲型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV进行同源性比较,氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%,因此推测辽宁分离株属于美洲型。     

猪繁殖与呼吸综合征的诊断

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种猪繁殖和呼吸障碍的传染性疾病。母猪表现为流产、早产、死产、木乃伊胎及弱仔等。仔猪和育肥猪则表现为呼吸困难。仔猪发病率和死亡率很高,对养猪业构成了重大危害。1临床症状妊娠后期母猪突然出现发热(可高达40℃以上),精神沉郁,嗜睡,食欲减退,呼吸困难,有些母猪发生流产、产死胎、木乃伊胎和弱仔。仔猪临床症状明显,早产的仔猪当天或几天内死亡。初生仔猪发热,喜扎堆,拉稀,多呼吸困难,呈腹式呼吸。断奶仔猪主要表现呼吸困难、咳嗽、厌食,耳部及腹下皮肤发红,严重的耳尖发…     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白和SEA共表达核酸疫的构建及鉴定

构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）M蛋白和金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）共表达的核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。将采自长春患PRRS病猪的组织剪碎充分研磨,提取病毒RNA后,用RT-PCR的方法特异性扩增PRRSV长春株的ORF6基因（M蛋白）片段。将该片段定向插入到载体pKS-SEA上,双酶切获得片段SEA-ORF6,再将其克隆到真核表达载体pVAXI中,构建重组质粒pVAXI-SEA-ORF6,转化大肠杆菌。经酶切鉴定后,将构建的阳性重组质粒在BHK细胞中表达。通过间接免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性,用Western blot分析表达蛋白的特异性。结果表明,所构建的重组质粒pVAXI-SEA-ORF6在BHK细胞中得到了表达,为进一步研究PRRSV基因工程疫苗奠定了基础。     

黄芪多糖对仔猪免疫功能的影响

选用24头20日龄三元杂交仔猪,分为对照组和3个试验组(试验组仔猪在20日龄、35日龄时分别肌肉注射黄芪多糖2,4,6 mL),并分别于20日龄、35日龄、50日龄采血检测仔猪外周血嗜中性白细胞百分数、猪瘟抗体水平、淋巴细胞转化率等免疫指标。结果表明:应用一定剂量的黄芪多糖能极显著提高仔猪猪瘟疫苗的抗体水平(P<0.01),显著提高仔猪外周血嗜中性白细胞百分数和淋巴细胞转化率(P<0.05)。表明黄芪多糖对仔猪的免疫功能具有一定的促进作用。     

牛肉中沙门氏菌的检测

对95份牛肉样品进行沙门氏菌实验室检测,通过增菌、选择性分离培养及生化试验、血清学鉴定等检验,结果3份样品检出沙门氏菌,检出阳性率为3．15％。