葛根芩连汤对抗生素相关腹泻肠道乳酸杆菌属的影响研究

为了探讨葛根芩连汤对抗生素相关腹泻模型肠道中乳酸杆菌属的调理作用,运用氨苄青霉素灌胃建立巴马猪抗生素性腹泻动物模型,用葛根芩连汤进行治疗,处死巴马猪并收集不同位置的肠道内容物(包括十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠)作为检测样品;通过建立定量检测乳酸杆菌属的荧光定量PCR方法,对葛根芩连汤治疗前后肠道内乳酸杆菌的动态变化进行检测。结果显示,与正常对照组相比,模型组肠道内乳酸杆菌属含量显著降低(P0.01);与模型组相比,葛根芩连汤治疗组乳酸杆菌在各个肠段中数量明显上升(P0.05)。长期使用抗生素会引起肠道内优势杆菌乳酸杆菌属数量明显减少;葛根芩连汤对抗生素相关腹泻模型肠道乳酸杆菌属具有调理作用。     

胰腺癌人源噬菌体单链抗体库的构建及初步筛选

提取胰腺癌患者的外周淋巴细胞总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出人源抗体H链和L链的可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,然后将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,并电转化至感受态TG1菌,经辅助噬菌体M13K07拯救,获得胰腺癌人源噬菌体单链抗体库。结果表明,从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗胰腺癌单链抗体的策略是可行的。     

胶体金免疫层析法快速诊断犬弓首蛔虫病

[目的]建立了一种能快速诊断犬弓首蛔虫病方法。[方法]以胶体金标SPA和犬弓首蛔虫（Toxocara canis）抗原蛋白制备免疫层析试纸条,并对其灵敏度和特异性进行评价。采用该试纸条和虫检法对200份犬血清样本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。[结果]组装的犬胶体金免疫层析试纸条的最低检测线为0.20μg/ml,灵敏度很好;与犬的其他寄生虫病的阳性血清进行反应,均成阴性;对200份犬血清样本的阳性检出率为10%,而虫检法的阳性检出率为2%。[结论]胶体金免疫层析法诊断犬弓首蛔虫病具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的快速检测。     

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

应用斑点免疫金渗滤法诊断犬弓首蛔虫病

根据免疫渗滤原理,采用犬弓首蛔虫抗原蛋白和胶体金标记SPA,建立抗犬弓首蛔虫抗体的斑点免疫金渗滤法(D IGFA)检测200份犬血清样本。结果:阳性检出率为8.00%(16/200);血清样本对应犬粪便用饱和盐水漂浮法检查虫卵,阳性检出率为2.0%(4/200)。结论:斑点免疫金渗滤法具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的早期、快速检测。     

肠侵袭性大肠杆菌感染野猪的诊断和药敏试验

无菌取病死野猪的心脏、肝脏、肺脏、脾脏及肾脏等组织病料,进行细菌的分离培养与PCR鉴定,分离出肠侵袭性大肠杆菌。结合临床症状、剖检病变和实验室诊断,从而确诊野猪病死于肠侵袭性大肠杆菌感染。并对分离菌株进行药敏试验,为野猪的肠侵袭性大肠杆菌感染疾病的诊断和防治提供参考。     

猪蛔虫卵可溶性抗原单链抗体库的构建及初步筛选

为进一步研制抗猪蛔虫的高特异性、高亲和力的基因工程抗体奠定基础,以猪蛔虫未成熟虫卵可溶性抗原免疫BALB/C小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,以SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB-5E载体,并转化至感受态TG1菌,经...     

应用正向间接血凝试验检测山羊痘抗体

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-200柱层析的方法纯化山羊痘病毒,以病毒抗原致敏绵羊红细胞建立了山羊痘正向间接血凝试验,并进行了最佳试验条件的摸索.结果表明,试验所制备的诊断液能与山羊痘参考阳性血清发生特异性凝集,其凝集现象能被山羊痘阳性抗原特异性抑制,与其它常见的动物病阳性血清无交叉反应.用本方法及琼脂扩散试验对山羊痘血清进行检测,IHA阳性检出率为89.1%（41/46）;而AGP阳性检出率为34.8%（16/46）.表明正向间接血凝试验比琼脂扩散试验敏感性高.本次试验制备的正向间接血凝试验诊断液可用于兽医临床上进行快速诊断.     

抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。     

葛根芩连汤对小鼠血清及粪便代谢的影响

为了探索葛根芩连汤对小鼠血清色氨酸及主要代谢产物和粪便中部分短链脂肪酸的影响,试验通过葛根芩连汤灌胃小鼠,分别在干预7 d和14 d后采集样本,运用高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UVD)法测定小鼠血清中犬尿氨酸(Kyn)、色氨酸(Trp)与5-羟色胺(5-HT)浓度,气相色谱(GC)法测定小鼠粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量。结果表明:与空白组相比,用药组小鼠血清Kyn和5-HT浓度明显升高(P0.05),Trp无明显变化(P0.05);给药7 d后粪便中丙酸浓度上升(P0.05),用药14 d后乙酸、丙酸和丁酸浓度极显著升高(P0.01)。说明葛根芩连汤对小鼠血清Trp及主要代谢产物和粪便中部分短链脂肪酸存在一定的影响。