金属蛋白酶组织抑制剂在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的作用

由弧菌感染引起的疾病是影响鲍存活率的主要因素,实验以皱纹盘鲍为研究对象,探讨金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的功能及其与基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP-1)的相互作用关系....     

皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶的分离纯化及性质

脯氨酰内肽酶(Prolyl Endopeptidase,PEP)广泛分布在动植物和微生物体内,参与细胞生长和代谢调控。PEP在哺乳动物生殖器官的生长发育过程中起着重要作用,但贝类PEP与性腺发育是否有关尚未有相关报道。本研究以皱纹盘鲍为对象,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)在性腺检测到有最高的基因表达量和较高的酶活性。通过硫酸铵分级沉淀和连续柱层析,从皱纹盘鲍性腺中分离纯化得到分子量约为82 ku,等电点约为5.5的PEP,其最适温度和最适pH分别为25 °C和6.0,在15~25 °C和pH 5~8能够保持较高的酶活性。利用LC/MS/MS分析纯化蛋白,得到182个氨基酸残基,与皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶一致。圆二色谱分析显示,温度对PEP二级结构有较大的影响,拟合热变性温度为51.4±0.2 °C。为了进一步探究PEP在鲍鱼性腺发育过程中的作用,对不同发育时期(生长初期、前期、中期和后期)的雌雄鲍鱼,采用免疫印迹(Western Blot)和qRT-PCR分析性腺中PEP的蛋白和基因表达水平。结果表明,PEP在雄性和雌性性腺的各个时期均能被检测到,在雄性性腺的成熟中期和雌性性腺的成熟后期表达量最高。PEP在鲍鱼性腺不同发育时期时表达量的差异表明其可能参与到性腺发育的过程。     

蓝圆鲹分离蛋白酶解产物制备及其抗大米淀粉老化特性

为了进一步拓展海洋鱼蛋白在食品中的应用,以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)分离蛋白为原料,利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物(blue round scads protein isolate hydrolysate,BPIH),并研究其对大米淀粉(rice starch, RS)短期老化的抑制作用。通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH,并分别按RS的3％、6％、9％(质量/质量)进行添加。通过测定RS的凝沉性、动态粘弹性、热学特性以及微观结构分析评价BPIH的抗淀粉老化活性。结果表明,响应面法确定的最佳条件为：酶底比5000:1(U/g)、酶解时间3 h、料液比1:3.81、酶解温度46.36 ℃、酶解pH 6.30,氮溶指数(NSI)实际值为85.41±0.82%,与预测值86.37％接近。该酶解条件下BPIH水解度达到21.62%。BPIH中小于1000 Da的肽占79.94%,主要为小分子低聚寡肽。加入BPIH可以减弱RS的凝沉现象,降低RS在4 ℃保存过程中的储能模量(G"),显著降低老化后RS的峰值温度(Tp)和焓值(ΔHr)(P <0.05);加入BPIH的大米淀粉,老化后微观结构有较大孔洞,提升了淀粉糊化后保留内部水分的能力。以上结果表明,BPIH能够抑制RS在4 ℃保存期间凝胶网络和微晶结构的形成,同时可能限制了淀粉分子间的聚集,抑制或延缓RS的短期老化。本研究为蓝圆鲹分离蛋白酶解物在食品蛋白配料中的应用提供理论参考。     

砂砾荒地栽桑成活好

我场位于河南省西南部伏牛山区,当地以盛产柞蚕丝著名,这里的山大都是石块,适合柞树生长。1952年,决定在这里试制普通种推广,因为要制种就要有一定数量的桑叶作饲料,可是这里的山大部是石块,适合柞树生长,栽培桑树是有困难的,如以平地栽桑与党的“不与棉粮争地”的方针相违背,有人提议将桑苗栽到牙河旁的砂砾荒地上,在这块荒地上栽桑,技术人员是有着不同的顾虑,因为牙河旁的几百亩砂荒地,几十年来没收过一粒粮食,只长芭茅,栽桑树是否能成活,有怀疑。但在党和群众的大力支持下,决定在砂砾荒地上试栽桑树,栽植时采取了开掘植穴深大,试入客土,多施腐熟堆肥的办法。细致地进行整地栽桑。 1952年开辟桑园100亩,栽植湖桑10000余株,成活率达95％以上。但由于肥培管理不注意,受浮尘子的幼虫为害,1953年的晚春又受寒露害,影响了桑树的     

大黄鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的克隆、表达及性质

为探究大黄鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)的性质,实验采用生物信息学方法对大黄鱼MBSP进行基因检索与筛选,通过分子克隆得到大黄鱼MBSP编码区全长cDNA并构建毕赤酵母表达系统得到重组蛋白质(Lc-rMBSP),分析Lc-rMBSP的酶学性质和二级结构并通过同源建模分析Lc-MBSP的三级结构。结果显示,大黄鱼肌原纤维蛋白中存在MBSP,在55°C下活性最高。大黄鱼基因组中注释为类胰蛋白酶的基因有16条,对这些基因与淡水鱼MBSP进行系统进化树分析和多序列比对,得到同源性较高的基因序列(Lc-MBSP)。Lc-MBSP编码区全长735 bp,共编码244个氨基酸残基。通过毕赤酵母重组表达,分离纯化得到分子量约28 ku的重组蛋白质Lc-rMBSP。表达蛋白的最适温度和pH分别为50°C和8.0。圆二色谱分析表明,温度对Lc-rMBSP二级结构具有较大的影响。Lc-rMBSP在较宽的温度范围内(40～60°C)对MHC具有较高的水解活性。Lc-rMBSP的最适底物为Boc-Leu-Lys-Arg-MCA,并且特异性切割羧基侧的精氨酸残基,而不分解赖氨酸残基。通过同源建模得到Lc...