鳙小卫星DNA的克隆

鳙基因组ＤＮＡ 经内切酶Ｓａｕ３ＡⅠ完全酶切后，与Ｂａｍ ＨⅠ－ ｐＵＣ１８ 质粒连接，转化ＤＨ５α后，获得９３３ 个重组体。用人源小卫星探针３３ ．１５ 对重组体进行原位杂交筛选，获得１４ 个阳性克隆，取其中的１ 个阳性克隆（ 即小卫星ｐＢＣ１７４） 作探针，与５ 尾鳙和４ 尾鲢基因组ＤＮＡ 杂交，能产生具有高度变异性的、个体特异性的ＤＮＡ 指纹图，表明克隆的鳙小卫星ｐＢＣ１７４ 可用于鱼类ＤＮＡ 指纹分析。     

恩诺沙星对红笛鲷血清中碱性磷酸酶活力、抗体IgM含量、溶菌酶含量及其抗菌能力的影响

以间隔200mg／kg的恩诺沙星设置8个浓度梯度腹腔注射红笛鲷进行急性毒性实验，测得其安全浓度为67．56mg／kg，参考安全浓度及日常生产给药量取0、20、40、80mg／kg鱼体重恩诺沙星，以腹腔注射及拌料投喂两种不同给药方式，研究恩诺沙星在该浓度范围内对红笛鲷血清中一些免疫指标及其感染细菌后死亡率的影响。实验结果表明恩诺沙星在40m非g浓度组中提高AKP活力、IgM含量、溶菌酶含量的同时可提高红笛鲷抵抗外界细菌感染的能力（P〈0．05）。当用药浓度不足（20mg/kg组）或浓度过高（80mg／kg组），虽然对AKP活力和IgM含量也有影响，但在投喂组中，红笛鲷体内的IgM含量受抑制显著，经腹腔注射2．3×10^7 CFU／mL溶藻弧菌 （ Vibrio alginolyticus ）攻毒后，注射组中相对生理盐水组的死亡率55％；20、40、80mg／kg浓度组红笛鲷的死亡率分别为45％、30％、50％；投喂组中，0、20、40、80mg，kg浓度组红笛鲷的死亡率分别为55％、40％、30％、60％；40mg／kg浓度组中抗菌能力增强；20、80mg／kg浓度组中红笛鲷抗菌能力不受影响或有负面影响。     

中草药对建鲤非特异性免疫功能的影响

用添加中草药的鲤配合饲料饲喂建鲤(Cyprinnus var．Jian)后,测定了建鲤非特异性免疫指标。饲喂药饵Ⅰ 10、15、30 d后,氯化硝基四氮唑兰(NBT)阳性细胞数分别为 27±3．45、39±6．04和 38±4．81,溶菌酶活力分别为 0．013±0．0017、0．018±0．0053和 0．021±0．0037;饲喂药饵 Ⅱ 10、15、30 d后,NBT阳性细胞数分别为 30±2．23、87±8．57和82±7．42,溶菌酶活力分别为0．015±0．0020、0．044±0．0017和0．033±0．0011;而对照组NBT阳性细胞数分别为28±2．18、27±4．05和29±3．56,溶菌酶活力分别为0．013±0．0010、0．012±0．0031和0．015±0．0046。结果表明,饲喂药饵Ⅱ 15、30d后的NBT阳性细胞数和溶菌酶活力均显著高于对照组(P＜0．05)。因而,本配方的中草药按质量分数为1．0%的量加入到饲料中,既能明显提高建鲤的吞噬细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的数量,又能提高其溶菌酶的活力,从而明显提高建鲤的非特异性免疫能力。     

中华鳖脾脏在HRP刺激下形态结构的变化

辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）免疫中华鳖后，刺激其脾脏的组织结构发生变化。免疫后第五天，动脉周围淋巴鞘（ＰＡＬＳ）内嗜派若宁细胞增多，主要为淋巴母细胞，椭球周围淋巴鞘（ＰＥＬＳ）和红髓则未见变化。免疫后第十天，白髓增殖显著，嗜派若宁细胞增多到整个免疫过程中的最高峰，尤其是ＰＥＬＳ内嗜派若宁细胞数量几乎与ＰＡＬＳ持平。免疫后第十五天，白髓比例明显减少，可见许多处于不同排空程度的淋巴鞘，嗜派若宁细胞也开始减     

中华鳖同工酶研究

采用垂直淀粉胶电泳对中华鳖脑、眼、心、肌、肝、肾和卵巢七种组织中的六种同工酶系统（ＬＤＨ、ＡＤＨ、ＩＤＨ、ＭＥ、Ｇ６ＰＤＨ、ＥＳＴ）进行研究，构建了中华鳖同工酶酶谱，并利用草鱼ＬＤＨ－Ｂ４抗体对中华鳖ＬＤＨ酶谱进行了免疫化学分析，确定了中华鳖ＬＤＨ同工酶酶谱和亚基组成，揭示了鱼类ＬＤＨ与爬行类ＬＤＨ在进化上的保守性     

吉富罗非鱼mIgD基因恒定区序列的原核表达及多克隆抗体的制备

实验采用原核表达方法成功获得吉富罗非鱼m Ig D基因恒定区融合蛋白,同时利用纯化的MIGD融合蛋白,制备了兔抗MIGD多克隆抗体。ELISA检测MIGD融合蛋白效价高达1∶512 000,说明MIGD蛋白具有较强的免疫原性,可以诱导罗非鱼机体产生相应较强的免疫应答。     

五味子和黄精对副溶血弧菌及其生物膜的体外抑制作用

采用琼脂扩散法,分别测定五味子(Shisandra chinensis)、黄精(Polygonatum sibiricum)对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的体外抑菌作用;选用倍比稀释法确定五味子、黄精对副溶血弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);采用改良微孔板法(MTT)评价两种中草药液对溶藻弧菌生物膜形成的影响。结果表明,两种中草药都有不同程度的抑制副溶血弧菌的作用,五味子对副溶血弧菌的抑菌圈直径为18.67(±0.2)mm,MIC为1.56 mg/m L,MBC为3.125 mg/m L;黄精的抑菌圈直径为11.26(±0.6)mm,MIC和MBC分别为1.56、3.125 mg/m L。当药物浓度达到3.125 mg/m L以上时,五味子和黄精对副溶血弧菌生物膜的形成有极显著抑制作用。     

草鱼出血病分子流行病学及GCRV多样性研究

[目的]分析不同基因型GCRV分离株与患草鱼出血病草鱼症状的相关性。[方法]采用RT-PCR检测患病草鱼,应用生物信息学方法分析基因型内和基因型间不同分离株间的差异。[结果]对近3年来草鱼出血病分子流行病学分析发现,患草鱼出血病病鱼多为"肠炎型"症状,且检测发现其病原多属于GCRV基因型Ⅲ型。对GCRV的多样性分析表明,不同分离株同源蛋白的同源率高达93%以上,却被给予完全不同的名称,给GCRV多样性研究带来一定的困难;同一基因型不同分离株同源蛋白间的变异位点较少,且功能位点发生变异的更少;不同基因型不同分离株同源蛋白间的保守位点较少,且这些保守位点中只有极少数位点为功能位点;不同基因型分离株同源结构蛋白间存在较大的差异,且同源非结构蛋白间的差异更为显著。[结论]草鱼出血病不同临床症状可能与其病原基因型不同有关。     

五倍子和石榴皮对溶藻弧菌及其生物膜的体外抑制作用

[目的]明确五倍子(Rhus chinenis)、石榴皮(Folium sennae)对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及其生物膜的体外抑制作用。[方法]采用琼脂扩散法,分别测定五倍子、石榴皮对溶藻弧菌的体外抑菌作用;选用倍比稀释法确定五倍子、石榴皮对溶藻弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);采用改良微孔板法评价2种中草药液对溶藻弧菌生物膜形成的影响。[结果]2种中草药都有不同程度的抑制溶藻弧菌的作用,五倍子对溶藻弧菌的抑菌圈直径为(16.37±0.14)mm,MIC和MBC均为6.25 mg/m L;石榴皮对溶藻弧菌的抑菌圈直径为(12.37±0.06)mm,MIC和MBC分别为12.50、25.00 mg/m L。当药物浓度在1.56 mg/m L及以上时,五倍子对溶藻弧菌生物膜的形成有极显著抑制作用;药物浓度在6.25 mg/m L及以上时,石榴皮对溶藻弧菌生物膜的形成有极显著抑制作用。[结论]五倍子和石榴皮对溶藻弧菌及其生物膜均有抑制作用。