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新城疫病毒F48E9株NP基因的克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
根据NDV NP蛋白已知基因序列设计合成了一对引物，利用RT-PCR扩增出了F48E9株NP基因1598bp的片段，将该片段克隆到pMD18-T Vector上，并对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定，结果证明我们得到了这个基因片段的阳性重组子。为了更充分证实所得阳性质粒的可靠性，采用Sanger's双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定，获得了F48E9株NP基因片段的基因序列，利用DNASIS分析软件，将F48E9株与La Sota株的相应序列进行比较，其核苷酸序列同源性为88.2%。至此，我们获得了F48E9株NP基因的全长克隆。 相似文献
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为研究白介素15(Interleukin-15, IL-15)在松江鲈(Trachidermus fasciatus Heckel)先天免疫中的功能，本研究利用RACE技术克隆得到松江鲈IL-15基因(命名为TfIL-15)的全长cDNA序列，其长度为1140 bp，包括5¢-非编码区(5¢-UTR) 165 bp、开放阅读框(ORF) 522 bp和3¢UTR 453 bp。在5¢UTR区域，存在4个读码框外的AUG翻译起始位点。基因ORF编码173个氨基酸(aa)，其中，前59 aa为信号肽序列。成熟肽全长为114 aa，预测分子量为12.975 kDa，理论等电点为5.15。同源比对发现，鱼类IL-15变异程度较高，TfIL-15与其他鱼类IL-15同源性在23%~61%之间。多序列比对和三维结构构建结果显示，TfIL-15具有典型4个α螺旋二级结构，形成二硫键的4个半胱氨酸高度保守。qRT-PCR分析表明，TfIL-15广泛表达于松江鲈各组织中。腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)后，TfIL-15 mRNA在血液、皮肤、肝脏和脾脏中均上调表达。在皮肤和血液中，刺激后2 h表达量迅速上调至最高峰，分别为对照组的74倍和41倍。脾脏和肝脏在刺激后12 h分别达到对照组的3倍和18倍。肝脏中，刺激后96 h，表达量再次上调至对照组的86倍。上述结果表明，TfIL-15可能参与了松江鲈抵抗外界刺激的先天免疫过程。另外，通过构建TfIL-15成熟肽的原核表达载体，成功获得重组蛋白，为进一步研究TfIL-15蛋白的功能奠定了基础。 相似文献
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核衣壳蛋白及“六碱基规则”在新城疫病毒复制中的作用 总被引：1，自引：0，他引：1
新城疫病毒 (ＮＤＶ)属于副粘病毒科副粘病毒亚科腮腺炎病毒属。是一种有囊膜的单股负链ＲＮＡ病毒 ,病毒ＲＮＡ包裹于核衣壳结构中 ,病毒粒子含有 6种结构蛋白核衣壳蛋白ＮＰ(ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎ)、磷蛋白Ｐ(ｐｈｏｓｈｏｐｐｒｏｔｅｉｎ)、基质蛋白Ｍ(ｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ)、融合蛋白Ｆ(ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ)、血凝素＿神经氨酸酶ＨＮ(Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ＿Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ)和ＲＮＡ依赖的ＲＮＡ聚合酶Ｌ ,其中ＮＰ、Ｐ、Ｌ外加上几种细胞的蛋白组成转录复合体。转录复合体中的核… 相似文献
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根据NDVP蛋白己知基因序列设计合成了一对引物PU/PL ,利用RT_PCR扩增出了F4 8E9株P基因 12 72bp的片段 ,将该片段克隆到pMD18_TVector上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,结果证明我们得到了这个基因片段的阳性重组子。为了更充分证实所得阳性质粒的可靠性 ,采用Sanger’s双脱氧末端终止法对阳性重组子从 5’端进行核苷酸序列测定 ,获得了F4 8E9株P基因片段 5’端的基因序列 ,利用DNASIS分析软件 ,将F4 8E9株与LaSota株的相应序列进行比较 ,其核苷酸序列同源性为 83 7%。至此 ,我们获得了F4 8E9株P基因的全长克隆 相似文献
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根据NDVP蛋白已知基因序列设计全盛了一对引物PU/PL，利用RT-PCR扩增出了F48E9株P基因在272bp的片段磁针 该片段克隆到pMD18-TVector上，并对所得到的重组质粒进行酶切分析，PCR鉴定，结果证明我们得到了这个基因片段的阳性重组子，为了更充分证实所得阳性质粒的可靠性，采用Sanger's双脱氧末端终止法对阳性重组子从5’端进行核苷酸序列测定，获得了F48E9株P基因片段5’端的基因序列，利用DNASIS分析软件，将F48E9株与La Sota株的相应序列进行比较，其核苷酸序列同源性为83.7%，至此，我们获得了F48E9株P基因的全长克隆。 相似文献
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