Culture and Identification of Myoblasts Isolated from Duck Embryos

Using embryonic myoblasts to research the formation and de-velopmental mechanisms of skeletal muscle is becoming a research hotspot. This study aimed to establish a method of isolation, culture and identification of my-oblasts in duck embryos. [Method] Pectoral and leg muscle samples were isolated from the embryos of Gaoyou duck at 13 d of hatching, then disassociated with col-lagenase and trypsin and purified via differential adhesion. The isolated cells were cultured in vitro and detected for the expression of Pax7 protein using immunofluo-rescence technique. [Result] Myoblasts were obtained successful y both from pectoral and leg muscles in duck embryos and these cells proliferated strongly and differen-tiated wel . Immunofluorescence staining showed that more than 95% cells could express Pax7 protein. [Conclusion] In summary, we report the successful establish-ment of a complete system for the isolation, purification, identification and culture of myoblasts from duck embryos.     

牛胎儿神经干细胞的分离培养与鉴定

分别采用机械分离法和酶消化分离法从胎龄为3个月的牛胎儿脑组织中分离培养牛神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),比较这2种方法对NSCs培养的影响。根据培养液中是否添加bFGF、EGF和FBS,选择不同的培养液培养NSCs,观察不同培养液对NSCs培养的影响,进而筛选出最适培养液。对NSCs及经诱导分化成的神经细胞进行生物学特性分析,包括细胞形态学观察和细胞免疫荧光检测。结果显示:组成成分为Neurobasal Medium+20μg/L bFGF+20μg/L EGF+20mL/L B27+100IU/mL青霉素+100IU/mL链霉素的神经干细胞培养液能够很好地支持牛胎儿NSCs的存活和增殖;机械分离法获得的牛胎儿NSCs的神经球数量和细胞活性要比酶消化分离法效果好;NSCs特异性标志物Nestin表达呈强阳性,Sox2、Nanog、Oct4和SSEA4等干细胞表面标志表达均呈阳性;经体外诱导的NSCs可分化为星形胶质细胞(表达GFAP)和神经元(表达βⅢ-tubulin)。结果表明,可从牛胎儿脑组织中分离培养出NSCs,NSCs可长期传代培养,具有分化功能。牛NSCs为克隆牛的供体细胞和转基因牛的受体细胞提供了细胞新来源。     

我国蝙蝠狂犬病病毒IRKV-THChina12株适应细胞培养后的分子生物学特性

通过对IRKV-THChina12适应细胞培养前后全基因组序列分析比对及与对不同种属狂犬病病毒氨基酸的比对,鉴定我国狂犬病病毒IRKV-THChina12株适应细胞培养后的分子生物学特性。结果显示,适应细胞培养后共发生11个核苷酸突变点和5个氨基酸突变点,其中1个氨基酸变异发生在P蛋白相互作用的LC8区域,2个氨基酸突变发生在M蛋白编码区,1个氨基酸突变发生在G(333位精氨酸未改变)蛋白编码区,L蛋白仅有1个氨基酸突变。结果表明,可能多个结构蛋白同时决定了病毒在Vero细胞的适应性,明确了本细胞适应毒株的分子生物学特性,为在细胞水平开展相关科学研究奠定了基础。     

利用WAVE波浪生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的研究

<正>猪细小病毒(Porcine Parvovirus)是引起猪繁殖障碍重要原因之一。主要表现为初产母猪及血清抗体阴性经产母猪发生流产、死产和胎儿木乃伊化,而母猪通常并不表现临床症状。目前在我国广泛应用的疫苗为猪细小病毒灭活疫苗,疫苗的生产采用的是传统的转瓶工艺,该工艺在我国疫苗行业已经使用了数十年,其操作技术相对简单和成熟。但是每个转瓶均是独立的细胞培养单元,每瓶细胞的质量、病毒产量和滴度都不同,导致疫苗批次间差异大,而且操作劳动强度     

高致病性AIV能规避干扰素诱导的抗病毒效应

体外细胞培养试验和哺乳动物试验表明,禽流感病毒(AIV)利用非结构蛋白1(NS1)来抑制干扰素(IFN)合成,但人们对NS1在鸡体内究竟发挥怎样的作用却知之甚少。德国弗莱堡大学和瑞士病毒与免疫预防研究所等机构研究人员发现,缺少NS1基因的H5N1亚型和H7N7亚型高致病性AIV对5周龄鸡的致病     

猪轮状病毒的细胞培养特性研究

目的:探讨动物轮状病毒细胞培养的特性和适宜条件,为研发诊断试剂盒和疫苗奠定基础。方法:制备三种细胞培养液(A、B、C组),经对MA-104细胞培养,确定最适培养液,高倍光镜下观察细胞形态的变化。结果:MA-104细胞用含10%小牛血清加高糖DMEM的培养液(C组)培养时贴壁较快,生长良好,成本较低。传代18h后出现明显的细胞病变(CPE),细胞膜缩融合、细胞层裂开、出现细胞核固缩,空泡化、染毒的细胞出现大片脱落区域,最后细胞死亡脱落,随传代次数增加,病变程度加深,CPE出现时间加快。没有脱落的细胞出现拉网现象。当CPE达到90%的时候开始收毒。结论:PRV在MA-104细胞中能良好生长,培养的最佳条件为37℃5%CO2,2-3d,传代18h后出现CEP,随传代次数增加,病变程度加深。     

美发现能攻入超级病菌内部的抗体

据每日科学网报道,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是葡萄球菌中的一种特殊菌种,由于它超强的抗药性也被称为超级病菌。在今年上半年加利福尼亚长岛召开的整形外科研究协会(ORS)年会上,美国罗切斯特大学医疗中心(URMC)研究人员称他们发现了一种抗体,能打开这种病菌的拉链,突破其     

披针叶黄华碱体外细胞毒性的研究

目前,一些植物中的生物碱成分已被开发成抗癌药应用于临床,并显示出很好的临床效果[1-2]。披针叶黄华碱具有多方面的药理作用[3-4],特别是该类化合物的抗癌活性引起了研究人员的兴趣。披针叶黄华碱所含的生物碱成分多样,生物碱单体是否具有抗癌作用及在总碱中所起的作用,有待于进一步研究。本试验对披针叶黄华碱的体外细胞毒性进行了研究,     

细胞培养技术的应用研究进展

细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境,放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下,使其生长、繁殖,并维持其结构和功能的一种技术,已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法。文章对细胞培养技术的应用作一综述。     

细胞培养及避免细胞污染的方法

1细胞培养1.1细胞传代培养当细胞生长至高密度时,即需分瓶至新的培养瓶中,否则就会影响细胞的生长,甚而引起死亡。一般分瓶的稀释比例为1∶3～1∶6,依细胞种类而异。一般步骤是先去除原培养瓶中旧的培养液,用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞2次,加入0.25%胰酶溶液37℃作用数秒至数分钟（时间依不同细胞而异）后,倒置显微镜下观察,当细胞呈圆粒状时,去掉胰酶溶液,加入适量新鲜培养基,以吸管反复吹打瓶壁数次,使细胞脱离瓶壁,均匀悬浮于培养液中。