鹿茸及鹿血中布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立可应用于快速检测鹿茸及鹿血中布鲁氏菌的方法,保证鹿产品的药用、食用安全,试验根据布鲁氏菌特异性基因IS711设计合成引物和探针,建立实时荧光定量PCR方法,对反应条件进行优化,并绘制标准动力学曲线,Y=-3.14X+37.62,R2=0.997.结果 表明:该方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,组内、组间重复性试验Ct值标准差小于0.5,变异系数均小于2％,最小检测拷贝数为2.65× 101 Copies/μL.该方法对目的 基因检测灵敏度高,可用于鹿茸及鹿血相关样本的检测,也可用于布鲁氏菌的定性和定量检测,为相关鹿产品的质量安全评估提供重要技术保障.     

布鲁氏菌BAB-RS25305蛋白对细胞炎症因子表达的影响

旨在对布鲁氏菌BAB-RS25305基因进行原核表达以及纯化,并探究其对细胞炎症细胞因子表达的影响。根据GenBank中所提供的BAB-RS25305基因序列(登录号:NC-007618.1)设计1对特异性引物,通过PCR扩增出BAB-RS25305基因片段并连接至PMD19-T载体,将构建好的PMD19-T-BAB-RS25305重组质粒转化至E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒经HindⅢ、EcoRⅠ双酶切后将产物连接至pET-32a载体,然后转入E.coli BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达并且纯化重组蛋白BAB-RS25305,将纯化后的蛋白以终浓度为50μL/mL刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7,Real-time PCR和Western blot检测炎症相关因子NLRP3、caspase-1的表达变化。结果显示,成功构建了布鲁氏菌BAB-RS25305表达载体,经IPTG诱导表达后在32 ku左右出现一条特异性条带,与预期大小一致。用BAB-RS25305重组蛋白刺激小鼠巨噬细胞24 h后,发现与PBS对照组相比,BAB-RS25305重组蛋白试验组能够显著提高NLRP3以及caspase-1的表达。说明布鲁氏菌BAB-RS25305基因能够触发宿主细胞发生炎症反应,为揭示布鲁氏菌的胞内生存以及致病机理提供了理论依据。     

牛羊养殖中的布病防制问题

随着肉制品需求量的不断增加,牛羊养殖业也迎来了突飞猛进的发展,在实际牛羊养殖过程中,除了要不断提升牛羊的生长情况之外还需要做好牛羊各类疾病的管理和控制,避免牛羊疾病的大规模发展威胁到牛羊养殖的顺利开展,甚至降低牛羊肉制品的安全性和品质。本文主要从牛羊养殖工作方面入手,对布病的发展情况以及防治措施进行了简单的分析,也希望能够为相关牛羊养殖人员的养殖工作开展提供参考。     

羊布鲁氏菌病的综合防控

羊布鲁氏菌病(以下简称羊布病)是一种由布鲁氏菌侵入机体引起以生殖系统为主的多器官损伤的人畜共患传染病,笔者结合工作实践经验,对羊布病的流行病学、临床症状、病理变化和实验室诊断方法等方面进行了简要归纳,同时提出了坚持自繁自养、加强疫苗免疫预防,定期开展布病全群检测等措施,从而有效防控羊布鲁氏菌病的发生。     

湖南省新化县高风险区羊布鲁氏菌病横断面研究及活羊流通网络调查

湖南省新化县近几年动物布鲁氏菌病疫情和人间病例不断增多。为掌握新化县羊群布鲁氏菌病的群体流行率,了解饲养场户、贩运户和经销商对该病的知晓情况以及羊贩运户和经销商的一般经济行为,寻找养殖环节中导致布鲁氏菌感染的风险因素,应用流行病学方法,以新化县10个乡镇现存栏羊15只以上的养殖场户为研究对象,第一阶段以场户为单位,以估计流行率为目的,以名单为抽样框,随机抽样;第二阶段在群内选择个体,以发现疫病为目的,随机或基于风险采样。将采集的血清样品,采用虎红平板凝集和竞争酶联免疫吸附垂直试验进行检测。重点调查出现动物布鲁氏菌病疫情和人间病例乡镇的养殖场,以及活羊贩运经纪人和经销商等从业人员,掌握羊群布鲁氏菌病流行情况和活羊流通情况。调查结果显示:新化县高风险区存栏羊15只以上养殖场户的羊布鲁氏菌病流行率为0(95%CI:0～2.8%);新化县羊养殖场户以小规模自繁自养为主,一般放牧于自家附近山头;出栏羊主要在县内流通,养殖场户内生物安全防护措施不到位;养殖场户的布鲁氏菌病总体知晓率为80.6%,屠宰零售商为15.2%,贩运经纪人为25.0%,职业人群自我防护差;活羊调入以省外为主,冬季调运频繁,主要流向屠宰终端,经纪人在流通环节中充当重要角色。调查结果提示:应加强活羊流通领域的检疫监管,特别是冬季,要提高监测频次;当地需坚持实行"监测+扑杀"的综合防控策略,持续开展布鲁氏菌病相关的健康宣教和行为干预,重点针对屠宰经销商和经纪人,以提高职业人群的预防意识,培养其良好的职业行为和习惯。本研究为新化县布鲁氏菌病防控提供了依据,也为全国布鲁氏菌病防控积累了经验。     

上海市规模化奶牛场布鲁氏菌病和牛结核病风险评估分级体系研究

为尽快实现上海崇明奶牛布鲁氏菌病和牛结核病(以下简称"两病")区域净化示范区净化目标,通过建立奶牛场"两病"输入性风险评估和内部风险评估模型,结合奶牛场"两病"流行史,构建了上海市规模化奶牛场"两病"风险评估分级体系;应用该体系将奶牛场划分为高、中、低风险场,为实施分类管理策略奠定基础。运用该体系,对上海市崇明区奶牛场每年开展1次"两病"风险评估分级。经过连续3年的风险分级与管理,崇明区奶牛场的"两病"净化效率得到极大提高,并使崇明奶牛"两病"区域净化示范区顺利通过国家验收,表明该体系符合上海市奶牛"两病"净化工作实际。     

布鲁氏菌病研究进展

布鲁氏菌病的早期诊断及鉴定是该病防控的重要环节,其诊断技术主要包括细菌学诊断技术、血清学诊断技术以及分子生物学诊断技术。布鲁氏菌病防控应坚持预防为主的策略,其免疫主要以弱毒活疫苗为主,随着分子生物学及重组DNA技术的发展,基因工程疫苗成为近年研究热点,但目前尚未有鉴别疫苗免疫和自然感染的鉴别诊断技术及相应的疫苗制品。本文对布鲁氏菌病的病原学、流行病学、诊断技术和疫苗研究进展等方面进行概述,以期为建立灵敏性高、特异性强、高效便捷且易推广的布鲁氏菌病诊断技术和研发更加安全有效的布鲁氏菌病疫苗提供基础。