家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析

【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶（BmAChE）的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmAChE（rBmAChE）的生物活性。【结果】改造后的bmace经重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为70 kD的蛋白,具有AChE活性,酶比活力约为1 187 U•mg-1。抑制试验显示,该rBmAChE能够被毒扁豆碱强烈抑制,并且可被皮蝇磷等10种有机磷农药和克百威等5种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC50值可达2.78×10-10 mol•L-1。【结论】成功构建分泌表达BmAChE的毕赤酵母菌株,其表达了具有良好活性的rBmAChE,可用于进一步制备有机磷及氨基甲酸酯类农药快速检测分析制剂。     

气相色谱法测定食用油中反式脂肪酸

采用氢氧化钾-甲醇甲酯化、DB-23强极性毛细管柱气相色谱法对食用油中反式脂肪酸进行分离和分析。结果表明,在优化试验条件下,反式油酸甲酯和反式亚油酸甲酯的线性范围均为0～2.0mg/mL,相关系数0.999,检出限10μg/mL(S/N=3),加标回收率在90.2%～98.0%之间,相对标准偏差为1.5%～4.1%。本试验方法简便、快捷、准确,适用于食用油中反式脂肪酸的分析。     

抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化

为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,seFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响.优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%.     

昆虫抗菌肽研究与应用

昆虫抗菌肽(AMPs)是昆虫在受到刺激或感染之后,在其血淋巴中会产生的一种抗菌类物质,具有分子量小、稳定性好、广谱抗菌、无毒副作用等特点。随着抗菌肽家族的不断扩大,其各方面的研究也日益深入,昆虫抗菌肽作为一种新型短肽以其独特的特性已成为食品、农业、医药等领域的研究热点。简要综述了昆虫抗菌肽的生物特性、作用机理及应用现状。