共表达猪IL-4/6与抗菌肽融合基因的重组酵母菌的生物活性及其对小鼠免疫增强作用研究

为开发高效安全经济的免疫调节剂,本研究构建了共表达猪IL-4/6和猪抗菌肽融合基因VRP的重组毕赤酵母SG46P。通过猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验检测其发酵上清液的生物学活性和抑菌活性,并用该重组毕赤酵母对30只21日龄雌性ICR小鼠进行灌胃接种。接种后,每周采集小鼠尾部静脉血进行免疫功能分析试验;并在第28 d用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行小鼠腹腔攻毒试验。结果显示:实验组SG46P的发酵上清液较对照组能显著刺激猪淋巴细胞的增殖(p0.05),且该发酵上清液具有明显的抑菌作用(p0.05)。接种重组毕赤酵母SG46P的小鼠的体质量有所增加(p0.05)且其外周血中白细胞数量、血红蛋白含量均显著高于对照组(p0.05);其血清中Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平均较对照组显著增加(p0.05),其外周血中CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量均显著高于对照组(p0.05);TLR4、TLR9、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、CD62L、IL-7、IL-23、CAMP和Crp4基因的转录水平均显著高于对照组(p0.05)。攻毒后,接种SG46P的小鼠的生存率显著高于对照组(p0.05)。结果表明:重组毕赤酵母SG46P不仅能够显著提高小鼠免疫基因的转录水平,有效提高动物的先天和获得性免疫水平,还可明显增强小鼠抗感染能力,这为研制高效安全经济的分子免疫调节剂和防治动物传染病开拓了新途径。     

西南地区猪肠外大肠杆菌毒力基因检测及耐药性研究

为了解规模化猪场肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的毒力基因与耐药性的流行情况,本实验室于2008年～2011年间对中国西南地区61个不同规模化猪场的427份组织病料进行细菌检验。采用菌落形态、显微观察和16SrDNA PCR测序鉴定分离菌,共检出79株(18.5%)ExPEC。对小鼠致病性试验结果显示其中50个分离株具有致病性,致病菌为66.3%。此外,对其8种毒力基因PCR检测结果表明astA、escV、invE、Stx2e 4种基因检出率分别为48%、44%、10%、4%,其他4种毒力基因未检出。18种药物的药敏试验结果显示头孢噻呋(7.6%)、氨苄西林/舒巴坦(11.4%)、阿莫西林/棒酸(16.4%)相对敏感,其他药耐药率均高于24%,多重耐药严重。该研究结果对近年来猪源大肠杆菌病的防控和临床用药提供了实验依据。     

高原草地杀蝗菌株嗜烟碱节杆菌Arthrobacter nicotinovorans的分离鉴定及发酵条件优化

从青藏高原采集的土壤中筛选到一株具有杀蝗虫活性的细菌，根据菌株形态和生理生化特征，结合16S rRNA序列分析，鉴定为嗜烟碱节杆菌Arthrobacter nicotinovorans，编号GZ1-6。室内测定了菌株GZ1-6对东亚飞蝗若虫的致病力，结果显示菌株GZ1-6菌悬液对若虫的校正死亡率达到75.56%。测定了碳氮源、温度、初始pH、装液量以及培养时间对菌株GZ1-6生长和杀虫活性的影响，得到菌株GZ1-6分别在以蔗糖和酵母浸膏为碳氮源，pH 7.5、恒温35℃的条件下生长最好，培养2 d，杀蝗活性较优化前提高了7.77%。菌株GZ1-6能够有效侵染东亚飞蝗并将其致死，可作为优良菌株进行杀蝗虫生物农药的进一步研发。     

堰塘生态价值量化分析与工程应用

指出了随着经济发展所需建设用地的增加,区域生态安全受到严重威胁,大型工程项目的建设,使得土地利用类型发生变化,直接导致生态服务价值损失。堰塘作为成都平原独特的生态系统,不仅具有生产生活服务功能,更是在净化空气、小气候调节、水源涵养等方面具有重要贡献。基于Costanza提出的生态服务价值理论,以四川盆地为生态大区,对当量因子进行了修正,提出了一套适用于成都平原堰塘生态系统服务功能价值系数,并结合成都天府国际机场项目规划区域,进行了生态系统服务价值估算。结果表明:项目建设前后,堰塘生态系统总面积减少24.98hm2,生态系统服务价值损失高达370.62亿元。以该量化数据为依据,给出了生态补偿建议,为项目地绿地系统规划、边坡生态防护、人工湿地建设、生态建筑设计等提供了规划设计参数。此外,大尺度的生态服务价值核算理论,通过区域生态背景校正,与大型工程项目相结合,为工程项目生态建设提供了一种新的方法论。     

鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫增强效应研究

为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达质粒pcDNA3.1(+)连接构建了pDNAIL-1β和pDNAIL-16。分别将两种重组质粒与IBVDNA联合免疫SPF雏鸡并进行攻毒试验。结果表明,pDNAIL-1β和pDNAIL-16均能促进血清中特异性抗体水平和外周血T淋巴细胞亚群数量的增加(p<0.05),增强IBV DNA疫苗对同型强毒的保护率15%～25%,pDNAIL-1β提升DNA疫苗的抗体水平的时间比pDNAIL-16多7d。试验表明,鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫具有增强作用。     

望江楼公园珍稀濒危植物应用现状调查与分析

通过对成都市望江楼公园园林绿化植物的调查研究发现,共计8种珍稀濒危植物已经被应用于园林绿化,对这些植物的园林景观配置形式及效果进行分析,以期为将来珍稀濒危植物园林绿化应用提供相应参考依据。     

市售15种猪场消毒剂消毒效果的比较

为评价市售的15种消毒剂的消毒效果,采用悬液定量杀菌试验对15种消毒剂的杀灭能力进行实验室评价,从中选择最有效的3种进行喷雾消毒,检测其杀菌率。结果:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫均能够在10 min内100%的杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,而作用10 min对枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的杀灭率分别能达到82.9%,56.8%和59.3%,喷雾消毒后30 min和48 h的杀菌率分别为81.5%,65.1%,80.9%和54.2%,43.5%,55.2%。表明:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫的杀灭能力最强,现场消毒后以百胜-30和百毒杀S的杀菌和持续的效果最好。     

乌金猪、青峪猪和成华猪免疫器官多种免疫调节基因表达的比较

为了阐明乌金猪、青峪猪和成华猪这些地方猪种繁殖力高、抗病耐逆性强等分子免疫特征,采用实时荧光定量PCR方法,研究乌金猪、青峪猪、成华猪与约克夏猪的胸腺、脾脏、扁桃体、肠系膜淋巴结和肺门淋巴结中的选择素-L(CD62L)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和白细胞介素(IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15)mRNA的表达差异。结果显示:成华猪胸腺IL-2、IL-12、IL-6、IL-7、CD62L,脾脏IL-15,扁桃体CD62L,肠系膜淋巴结IL-2,肺门淋巴结TGF-β1 mRNA表达量均显著高于其他猪种(P0.05);乌金猪胸腺TGF-β1,脾脏CD62L,扁桃体IL-6、IL-7,肠系膜淋巴结IL-4 mRNA表达量显著高于其他猪种(P0.05);青峪猪肺门淋巴结IL-4、CD62L mRNA表达量显著高于其他猪种(P0.05)。研究结果为培育抗病力强的动物新品种和筛选抗病分子标记提供科学依据。     

成都寺观园林珍稀濒危植物应用现状调查分析

为了发挥珍稀濒危植物的园林观赏价值,对成都寺观园林珍稀濒危植物的应用现状进行了文献查阅及实地调查,分析了珍稀濒危植物的应用种类、数量、生长状态、保护状态、园林配置和古树名木,并在此基础上为珍稀濒危植物在寺观园林中更好地应用及保护提供了建议。     

不同品种猪感染HP-PRRSV后肺组织间PRRSV受体基因差异表达的研究

为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV） JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14 d肺脏中HSPG2、SIGLEC1、CD163、VIM和NMMHC-ⅡA 5个PRRSV受体基因的差异表达情况。结果显示,藏猪感染JXA1分离株后4和14 d肺脏中HSPG2的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,而感染后7 d HSPG2的表达量显著低于感染前（P < 0.05）,藏梅猪在感染后14 d HSPG2的表达量显著高于感染后7 d（P < 0.05）;藏猪感染后4和14 d肺脏中SIGLEC1的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪感染后4、7和14 d SIGLEC1的表达量均显著低于感染前（P < 0.05）;藏猪和藏梅猪感染后14 d肺脏中CD163的表达量均显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪则感染后7和14 d均显著低于感染前（P < 0.05）;藏猪感染后7 d肺脏中VIM的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪在感染后7 d显著低于感染前（P < 0.05）;藏梅猪感染后4 d肺脏中NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪在感染后4和14 d NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前（P < 0.05）。结果表明,5个PRRSV受体基因中,SIGLEC1和VIM基因可能是影响藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对JXA1分离株易感性存在差异的潜在关键基因。