枇杷果实EjNADP-ME2基因及启动子克隆与表达分析

以‘解放钟’和‘白梨’果实为材料,研究基于转录组筛选出的表达量较高且在2个品种中有差异的EjNADP-ME2（Unigene0001461）基因,采用RACE和RT-PCR技术成功克隆EjNADP-ME2的cDNA全长。系统进化树分析表明,EjNADP-ME2与苹果的NADP-ME基因关系最近。生物信息学预测结果显示,EjNADP-ME2蛋白应该位于细胞质中。用染色体步移法成功克隆了EjNADP-ME2的启动子序列,序列预测该基因启动子区域含有水杨酸、茉莉酸、脱落酸响应的顺式作用元件,此外还有厌氧诱导元件、MYB和MYC参与黄化和干旱诱导的结合位点MBS。荧光定量PCR分析表明,EjNADP-ME2基因的表达量变化趋势在2个品种中大致相同,均呈现出先降低后升高又降低的趋势,且该基因在低酸品种的表达量稍低于高酸品种。相关性分析结果显示,低酸品种EjNADP-ME2基因转录水平与苹果酸含量呈显著负相关。本研究的结果为进一步探究EjNADP-ME2基因在苹果酸代谢途径中的功能奠定坚实基础。     

枇杷黄酮醇合成酶FLS基因表达与黄酮醇积累的相关性分析

以解放钟枇杷为材料,分析果实发育过程中黄酮醇合成酶(Flavonol Synthase,FLS)基因表达与黄酮醇积累的相关性,进而探讨枇杷果实黄酮醇积累的分子机制。利用高效液相色谱法(HPLC)对不同时期枇杷果实黄酮醇含量进行测定,通过RT-qPCR技术检测了不同发育时期果实黄酮醇合成酶FLS基因的表达量。结果表明:枇杷果实中以黄酮醇含量最高,其次是二氢黄酮醇。黄酮醇含量在成熟过程中总体呈现下降趋势,特别在果实发育前期(花后55～65d)其含量下降幅度较大;而二氢黄酮醇含量呈上升趋势,黄酮醇合成酶FLS基因的表达量变化与黄酮醇含量变化趋势相似。枇杷果实不同时期的黄酮醇合成酶FLS基因表达量与黄酮醇含量呈显著正相关,但与二氢黄酮醇含量呈显著负相关,表明黄酮醇合成酶FLS基因对枇杷果实黄酮醇的合成具有明显的正调控作用。     

福建纹胸的胚胎发育

福建纹胸Ｚｈａｏ的成熟卵呈圆形,浅绿色,卵径１．３￣１．８ｍｍ。受精卵吸水后迅速膨胀,直径３．０￣３．６ｍｍ,强粘性。膨胀后的次级卵膜上有一凹入的“漏斗”状结构与初级卵膜相连,不易分开。水温１９．０￣２６．５℃时,胚胎发育历时５８ｈ３０ｍｉｎ;１５．６￣１８．５℃时,历时１１５ｈ５０ｍｉｎ。出膜仔鱼全长４．４￣５０ｍｍ。发育过程中胚胎位置状态的改变可以作为划分发育阶段的辅助标准。     

幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位基因HspB转化烟草的研究

幽门螺杆菌被世界卫生组织认定为一类致癌因子,其热休克蛋白(HSP)具有较强的免疫原性,存在着发展为疫苗成分的可能性.四川省农科院生物技术核技术研究所构建了幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位基因HspB植物表达载体pYHWHRI并转化进入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,EHA105).本文采用农杆菌介导的叶盘法对烟草(Nicotiana tabacum L.)叶片进行遗传转化.在含有卡那霉素(Kan)的MS筛选分化培养基上筛选,获抗性烟草植株.经PCR分子检测,其中6株已成功导入HspB基因.     

高淀粉专用型甘薯品种悬浮体系的建立及植株再生

利用目前四川省主推的6个高淀粉甘薯品种进行悬浮培养及有效植株再生的研究,对以MS为基础的10种胚性愈伤培养基进行分析,结果表明,茎尖分生组织培养基在添加1.8 mg/L 2,4-D、30 mg/L蔗糖的MS培养基上诱导的胚性愈伤组织最多。胚性愈伤组织在添加1.8 mg/L 2,4-D、30 mg/L蔗糖的MS培养基上进行震荡培养建立悬浮细胞系,悬浮培养40周后,进行植株再生培养,比较了3种以MS为基础的再生培养基,将直径大于1cm的大细胞团放在添加1.5 mg/L ABA、30 mg/L蔗糖的MS上获得再生植株最多,再生率为96%。     

甘薯块根储藏蛋白(Sporamin)启动子克隆及功能验证

提取甘薯“川薯34”总DNA,设计引物,通过高保真PCR扩增获得了长为1 144bp的甘薯储藏蛋白(Sporamin)基因启动子SpoA-p.PLACE在线分析表明:Sporamin启动子具有基本的启动子元件CAAT-box,并包含大量与储藏蛋白表达相关、抗逆相关及蔗糖表达相关的功能组件.构建植物表达载体pBI-SpoA-p::GUS、农杆菌工程菌株EHA105:pBI-SpoA-p::GUS后导入烟草及甘薯,分别得到15株烟草和10株甘薯的阳性转基因植株,GUS染色分析表明烟草各部位中只在根中有基因表达,甘薯根、茎和叶各部位未检测到活性.5％蔗糖诱导处理24 h后,在烟草根、茎及叶均观察到GUS活性;在甘薯中只有根有GUS活性.因此,可以看出此启动子为甘薯根部特异的表达启动子,并受蔗糖诱导而表达.     

福建纹胸的胚胎发育

福建纹胸Ｚｈａｏ的成熟卵呈圆形,浅绿色,卵径１．３￣１．８ｍｍ。受精卵吸水后迅速膨胀,直径３．０￣３．６ｍｍ,强粘性。膨胀后的次级卵膜上有一凹入的“漏斗”状结构与初级卵膜相连,不易分开。水温１９．０￣２６．５℃时,胚胎发育历时５８ｈ３０ｍｉｎ;１５．６￣１８．５℃时,历时１１５ｈ５０ｍｉｎ。出膜仔鱼全长４．４￣５０ｍｍ。发育过程中胚胎位置状态的改变可以作为划分发育阶段的辅助标准。     

甘薯ADP-葡萄糖焦磷酸化酶两个α亚基基因的克隆分析和植物表达载体的构建

ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)催化ADP-葡萄糖合成反应,是淀粉生物合成的限速酶之一。从高淀粉甘薯品种川薯34总RNA逆转录的cDNA中克隆了AGPa1和AGPa2两个α亚基编码序列,进行生物信息学分析后,插入植物高效表达载体pCamb ia1301构建了pC-AGPa1和pC-AGPa2两个双元表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105中。获得的工程菌菌株可用于遗传转化甘薯、马铃薯和木薯等重要的薯类作物,为薯类作物高淀粉育种奠定了基础。     

多肉植物玉扇组培快繁体系的建立

以多肉植物玉扇为试材,研究了外植体选择、培养基激素配比对玉扇组织培快繁的影响,以期优化玉扇的组织培养条件,建立适宜于工厂化育苗的玉扇组培快繁技术体系。结果表明:以玉扇的根颈横切片作为外植体效果最佳,玉扇最佳诱导愈伤组织培养基为MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA;最佳分生茎叶培养基为MS+2.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA;最佳生根培养基为MS+0.1 mg·L-1NAA。     

传染性鱼鳔炎与鲤春病毒病

传染性鱼鳔炎简称SBI,又名Aerostitis、鲤鱼传染性腹水症,是一种主要危害鲤科鱼类的传染病,能够造成重大经济损失。它和鲤春病毒病（简称SVC）。症状相似,关系密切。几十年来的研究表明：SBI致病因子主要包括弹状病毒（Rhabdovirus）和原生动物（Protozoa）两大类。1973年德国的Ahne最先从患SBI的病鱼体内分离得到一株弹状病毒,经动物回归实验证实该病毒确能引起SBI急性症状,之后Ahne和其他人又就该病毒做了进一步研究。后来人们又发现原生动物肾居球抱虫（SPhaerosporarenicola）也可引起急慢性SBI症状。本文将对SBI及其…