水稻基腐病菌HrpX/HrpY在致病性中的功能分析

【目的】由Dickeya zeae引起的水稻基腐病是水稻上重要细菌病害之一,迄今对该病原细菌的致病性调控研究尚不完善。论文旨在分析水稻基腐病菌（Dickeya zeae）双组分调控系统HrpX/HrpY的序列特征,研究该系统在水稻基腐细菌中的功能作用以及与下游基因的调控关系。【方法】对HrpX/HrpY序列进行生物信息学分析,构建带有反向筛选标记基因scaB的自杀重组质粒pKNG-ΔhrpX和pKNG-ΔhrpY,通过三亲转化方法分别将重组质粒导入野生型菌株EC1中,通过2次等位基因同源重组筛选获得基因缺失突变体ΔhrpX和ΔhrpY;比较突变体与野生菌的生长速率、胞外酶活性、毒素活性、运动性、菌膜形成能力,以及对水稻的致病性和对烟草的过敏性反应（HR）;进一步提取细菌总RNA,采用实时荧光定量PCR研究HrpX/HrpY双组分系统对下游基因表达量的影响。【结果】水稻基腐病菌EC1基因组中,hrpX和hrpY均为单拷贝,hrpX编码区长1 473 bp,编码490个氨基酸,hrpY长642 bp,编码213个氨基酸,hrpX和hrpY两者之间相隔32 bp,具有相同的转录方向,在功能上具有相关性。其中,HrpX是一个结合在膜上的组氨酸蛋白激酶,HrpY是存在细胞质中的效应调节蛋白,HrpX/HrpY两者构成双组分系统,并对下游hrp基因的表达具有调控作用。进一步通过遗传操作手段,成功构建了基因缺失突变体ΔhrpX和ΔhrpY,表型测定结果表明,突变体ΔhrpX和ΔhrpY的运动性减弱、菌膜形成能力降低、对水稻种子萌发的抑制作用减弱,且降低了对水稻的致病力,但ΔhrpX和ΔhrpY的生长速率、胞外酶和毒素的活性变化不明显,也不影响其在烟草上的HR。实时荧光定量PCR结果显示,突变体菌株ΔhrpX和ΔhrpY相对野生菌EC1表达量明显下降的基因有hrpA、hrpF和hrpN,而对毒素合成基因zmsA表达量的差异不明显,HrpX/HrpY双组分系统对hrp基因簇中大部分下游基因都有正调控作用,且HrpY的调控作用更加明显。【结论】HrpX/HrpY是水稻基腐病细菌中的一个双组分系统,调节病原细菌的运动性、菌膜的形成和病菌的致病力,正向调控一些下游hrp基因的表达。     

青枯病抗性不同的番茄土壤细菌生理群的数量变化

对青枯病抗性不同的番茄品种根际细菌生理群数量变化进行了研究.结果表明,番茄根际细菌种群和数量的变化随品种抗性、生育期不同和季节的变化而变化,其中氨化细菌的数量与番茄青枯病抗性呈正相关;根际细菌中氨化细菌、硝化细菌、好气纤维素分解细菌、固氮细菌和反硫化细菌等数量均表现为夏季高于冬季,而厌气纤维素分解细菌和硫化细菌的数量则表现为冬季高于夏季.     

广东西瓜果斑病的病原鉴定

在反季节种植的西瓜上发现1种新细菌病害,其症状与西瓜果斑病菌相似,通过病原菌的分离纯化,接种试验,菌体形态观察,染色反应、培养性状和生理生化特性测定,以及细菌的16S rDNA基因序列分析,确认该病原细菌为燕麦嗜酸菌西瓜亚种Acidovorax avenae subsp. citrulli.     

10种杀菌剂对马铃薯晚疫病的防治效果与经济效益评价

选择72%霜脲·锰锌(克露)可湿性粉剂(WP)、50%烯酰吗啉(安克)WP、25%嘧菌酯(阿米西达)悬浮剂(SC)、64%恶霜·锰锌(杀毒矾)WP、68%精甲霜灵·锰锌(金雷)水分散粒剂(WG)、70%丙森锌(安泰生)WP、68.75%氟吡菌胺·霜霉威(银法利)SC、18.7%烯酰·吡唑酯(凯特)WG、25%双炔酰菌胺(瑞凡)SC和50%多菌灵WP等10种药剂进行了田间马铃薯晚疫病防治试验。结果表明:除50%多菌灵WP之外,其他9种药剂对马铃薯晚疫病均具有明显的防治效果和增产效果,防效均达90%以上,增产10.90%～20.30%,净收入增加500～1000元·(667m2)-1。根据药剂的防效和增产效果,提出广东省马铃薯晚疫病防治的参考药剂,首先是72%霜脲·锰锌WP和50%烯酰吗啉WP,其次是68%精甲霜灵·锰锌WG、18.7%烯酰·吡唑酯WG、25%嘧菌酯SC、70%丙森锌WP和64%恶霜·锰锌WP。     

水稻细菌性基腐病品种抗性鉴定

对42个水稻品种进行了基腐病抗性鉴定，结果表明：Ⅱ优128、特优63、培杂72、培杂77、博优713等5个水稻品种表现为高抗基腐病；培杂981、博优122、大丰占、博优903等21个水稻品种表现为中抗；三二矮、特籼13等10个水稻品种表现为中感；95占、雪花占、三七早占等6个水稻品种表现为高感．     

烟草青枯病防治研究进展

烟草青枯病防治一直是生产上一大难题。本文综述了烟草青枯病防治研究，着重介绍了抗病育种，生物防治和土壤添加剂防治烟草青枯病的研究进展。最后讨论了烟草青枯病防治中存在问题及发展方向。     

放线菌对4种病原真菌的拮抗作用初探

从广州市郊和云南陆良39个点采集土样，经室内分离获得放线菌株73株，用4种病原真菌（玉米大斑病菌太和菌株、玉米大斑病菌良田菌株、茶树云纹叶枯病菌、茄子褐纹病菌）进行拮抗试验，结果筛选出具有明显抑菌作用的放线菌株18株，并对其拮抗作用及培养性状进行了分析。     

番茄品种抗性与青枯菌和土壤微生物的关系

对青枯菌（Ralstonia solanacearum）在番茄（Lyoopersicon esculentum Mill）抗、感品种根际土壤和根系组织中的数量变化，以及青枯菌与番茄相互作用后，抗、感品种根际微生物数量的变化进行了研究．结果表明，根际土壤中青枯菌数量与番茄品种抗性之间的关系不显著（P〉0．05），而根组织内青枯菌数量与番茄品种抗性密切相关；土壤接种青枯菌后第4d，抗病品种根际土壤真菌、细菌和放线菌数量均高于感病品种，并达到最高峰，第4d后微生物数量下降，并低于感病品种，而不接种青枯菌的对照组，抗病品种根际微生物的数量几乎都高于感病品种．     

广东省烟草青枯茵的菌系和遗传多样性

从广东省韶关和梅州2个烟草产区采集了来自8个县市的共38个烟草青枯菌菌株，对病菌的生物型、致病型和遗传多样性进行了测定，结果表明广东烟草青枯菌全部为生物型Ⅲ。通过在红花大金元，K326，岩烟97和系3等4个烟草鉴别品种上的致病性反应，将广东烟草青枯菌分为强致病力、中等致病力和弱致病力3种致病型，其中以中等致病力菌株为主，占78．9％；强致病力菌株占13．2％；弱致病力菌株占7．9％。从116个RAPD通用引物中筛选出10条引物，用于对38个烟草青枯菌株DNA的RAPD分析，扩增条带表现出明显的多态性，条带主要聚集在0．3～4．0kb之间。聚类分析这38个菌株可分为2个组群，即组群A和组群B。组群A中又可以分为7个亚组（A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7）；组群B也含有4个亚组（B1、B2、B3、B4）。研究结果还表明，广东烟草青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的寄主来源有一定的相关性，但与地理区域、生物型和致病型没有明显的相关性；生物型不能反映烟草青枯菌菌系的差异。 04—0463—06     

膜蛋白和糖蛋白免疫原对植物青枯菌血清分型比较

以青枯假单胞菌膜蛋白和糖蛋白为免疫原对植物青枯菌的血清分型进行了比较研究。４个菌株的膜蛋白抗血清和相应的４个糖蛋白抗血清的琼脂双扩散试验，在近抗原孔处，同源菌株均产生１条或２条清晰的沉淀带。膜蛋白的糖蛋白具有相似的特异性和种下区分作用，其血清分型结果完全一致。