不同温度下TMV侵染枯斑三生烟的LncRNA差异表达

【目的】 筛选不同温度下烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）侵染后枯斑三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN）差异表达的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）,研究lncRNA在枯斑三生烟抗性反应中的作用。【方法】 N基因的温度敏感性使枯斑三生烟在25℃时具备对TMV的抗性、在31℃抗性丧失,在这两个温度条件下对枯斑三生烟接种TMV和磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline,PBS）,48 h后提取系统叶总RNA,构建链特异性文库后进行深度测序。对测序结果进行过滤后利用HTSeq将有效数据与近缘品种TN90（N. tabacum var. TN90）基因组比对,筛选得到lncRNA后利用FPKM法估计lncRNA的表达水平。通过edgeR筛选差异表达lncRNA（differentially expressed lncRNA,DElncRNA）,并利用qRT-PCR技术对这一结果进行验证。通过共定位及共表达分析预测DElncRNA的靶基因,通过参考基因组注释、GO和KEGG富集分析研究靶基因的功能。【结果】 4个处理共12个样本经lncRNA-seq各测得约8 000万条clean reads,共获得4 737条已知lncRNA、40 169条新lncRNA。其中64个lncRNA在不同温度条件下TMV侵染后存在差异表达,qRT-PCR测定结果显示这些lncRNA的测序正确率在80%左右,表明本研究所得测序数据具备较高的可信度。对DElncRNA进行靶基因预测,发现一些基因同时被25℃下调和31℃上调的DElncRNA靶向。靶基因注释功能丰富,主要参与植物抗病、激素和代谢等生理过程。部分可能与激素通路相关的lncRNA,在25℃下TMV侵染时呈现下调趋势,而在31℃下TMV侵染则呈现上调趋势。GO富集分析显示靶基因主要参与构成膜、囊泡等组分,具备钙、钾离子通道抑制剂活性等分子功能,使相应离子得以转运引发随后的反应,同时也参与发病、抗原加工和呈现、细胞分裂素代谢等生理过程。KEGG分析发现靶基因显著富集在植物激素信号转导通路,25℃下调和31℃上调的DElncRNA靶基因同时富集在激素信号传导、ABC运输蛋白、苯丙烷类生物合成等通路。【结论】 不同温度（25℃和31℃）条件下TMV侵染枯斑三生烟后,长链非编码RNA差异表达,DElncRNA通过作用于激素信号传导、物质转运等过程参与寄主系统获得性抗性反应。研究结果可为揭示植物系统获得性抗性中lncRNA的调控功能以及新型抗病毒技术开发提供依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断及其分子特点

采用流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、病毒分离、分离毒株测序以及遗传演化分析的方法,对北京及其周边地区4个猪场剖检的4头猪进行分析。结果:流行病学和临床症状表现为急性高热性传染病;病理学观察为非化脓性脑炎和间质性肺炎等多器官严重的病理变化;RT-PCR和病毒分离确定该疫情的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。与典型PRRSV感染不同的是:成年猪感染率达50%以上,病死率达80%以上;PRRSV分离株全基因序列分析表明属于PRRSV北美洲型,特别是PRRSV NSP2不连续缺失30个氨基酸,说明此次流行的PRRSV毒株可能为高致病性毒株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。     

母羊的饲养管理技术要点

春夏秋是母羊配种、怀孕和产羔的旺季,精心管理母羊,是使母羊顺产、羔羊成活的关键.只有切实做好母羊的饲养管理,保证母羊全年有较好的营养供给,以才能实现母羊多胎、全产、全活、全壮的要求.     

烟草上列当研究现状

烟草上列当研究现状王凤龙王劲波钱玉梅（中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所山东青州２６２５００）段启斌史庆（河北省蔚县烟草公司）张根发戴勇（河北省烟草公司列当是我国的进境植物检疫对象，韩晓东等于１９８６年报道列当在新疆烟草上发生为害。...     

鸡传染性喉气管炎的病理学研究

本研究对１４ 周龄的４２ 只 Ｓ Ｐ Ｆ鸡经气囊感染鸡喉气管炎病毒，通过病理组织学和扫描电镜检查，对不同感染阶段试验鸡进行研究。试验结果表明：感染后１２ｈ 气管粘膜淋巴细胞开始增生，以后逐渐增多，在８～９ ｄ 时逐渐减少，１２ ｄ 时基本降到原有水平；感染后２４ ｄ 气管粘膜上皮细胞开始形成合体细胞，３～４ ｄ 时普遍转变为合体细胞，并坏死脱落，６～７ ｄ 时出现再生，１２ ｄ 时基本恢复原有结构；腺体细胞在感染后坏死最早最严重，腺体细胞也是包涵体形成最早的细胞；在感染１２ ｄ时，气管粘膜上皮细胞纤毛项端开始融合并缩短，随后融合加剧，最终变成颗粒状或断裂脱落，上皮细胞表面裸露。除气管的病变外，肺脏发生支气管炎及出现核内包涵体，脾脏淋巴细胞，巨噬细胞增生及坏死，胸腺和法氏囊淋巴细胞增生及轻度坏死等变化。     

四川烟草炭疽病的鉴定及防治技术研究

[目的]鉴定四川烟草上的一种叶斑病害,并探讨其防治技术.[方法]采用“柯赫氏法则”,对2012年在四川会东育苗温室红花大金元上发现的一种叶斑病害进行了鉴定,并研究了几种药剂对该病菌的防治效果.[结果]依据病害症状和病原形态特征确认为烟草炭疽病菌(Colletotrichum nicotianae Averna-Sacca);75％百菌清600倍稀释液、80％代森锌800倍稀释液、80％代森锰锌800倍稀释液、50％退菌特800倍稀释液、50％福美双500倍稀释液对炭疽病有较好的防治效果.[结论]为烟草炭疽病的防治提供了参考.     

玉米“3414”肥料效应试验报告

合理施肥是玉米获取高产的关键因素,为此,作者为获取玉米施肥模式进行了"3414"试验,获取了该地块先玉335品种的最佳施肥量。     

实验性兔出血症的病毒抗原定位及病理形态学研究

对5例健康对照兔及25例实验感染RHDV的不同发病阶段病兔用生物素—亲和素免疫酶组化(BA)技术和常规病理学方法进行研究。结果表明RHDV是侵害多种组织细胞的泛嗜性病毒,但其主侵器官是肝脏,主要靶细胞是肝细胞及血管内皮细胞。感染初期RHDV首先在宿主细胞核内出现,随着病情发展在核内增殖、聚集,至疾病严重期核内感染强度达到高峰,濒死期略有下降。疾病后期,核内的RHDV颗粒通过破损的核膜或核崩解向细胞浆扩散。但只要核的轮廓尚存,核内RHDV的密度始终高于胞浆。本病的主要病理变化为急性坏死性肝炎,诸多器官出血、弥漫性血管内凝血,后期发展为急性败血症。疾病的实质是RHDV损伤肝细胞引起的病毒性肝炎。出血是重要的病理变化之一,它是血管内皮损伤、DIC和其它多种因素致使毛细血管壁通透性增强的反映,属于继发性病变。本文对RHDV在宿主细胞内的定性、动态变化,以及各器官组织的病理形态学变化及临床症状作了详细描写。     

鸡肿瘤坏死因子的诱生及活性检测

通过对鸡静脉注射卡介苗 (BCG)和脂多糖 (L PS) ,应用 L92 9细胞检测鸡体外周血清、脾细胞和外周血白细胞肿瘤坏死因子 (TNF)活性 ,表明外周血清 TNF活性最高 ,其次是脾细胞 ,而外周血白细胞 TNF活性最低。本研究也表明在正常鸡的外周血液中有少量的 TNF