CMV侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究

【目的】研究黄瓜花叶病毒病（CMV）侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达和代谢途径响应。【方法】在结合气体交换和叶绿素荧光参数及抗性相关酶活性测定的基础上, 应用农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室自主开发的黄瓜cDNA芯片研究黄瓜在CMV侵染胁迫下的基因表达谱变化,并对其中5个具有代表性的基因通过实时荧光定量PCR（QRT—PCR）进行检测,以验证cDNA芯片杂交结果的可靠性。【结果】共获得67个差异表达显著的基因,其中42个基因下调表达,25个基因上调表达。这些差异表达的基因涉及了许多重要代谢途径。许多与光合作用、氮同化相关的基因受到明显的抑制;而一些防御相关基因和信号传导相关基因则诱导表达;同时,也发现了一些与CMV胁迫相关的功能未知基因或未有任何功能信息的基因。【结论】CMV胁迫引发了黄瓜代谢发生一系列复杂的适应性变化,PR1-1a等基因可能在黄瓜防御CMV侵染过程发挥着重要作用。     

水稻不同品种光合作用与Rubisco的关系

以两个不同产量性状的水稻品种为材料,研究高产水稻品种的高光合机理。结果表明：在剑叶生育过程中,高产水稻品种浙农９５２的光合速率始终高于浙农９６６;Ｒｕｂｉｓｃｏ初始活力,总活力、Ｒｕｂｉｓｃｏ含量和光合速率均显著相关;除最大值外,浙农９５２的Ｒｕｂｉｓｃｏ的初始活力,总活力均高于浙农９６６,但浙农９５２的Ｒｕｂｉｓｏｎ含量在剑叶发育前期明显低于浙农９６６,后期则因浙农９５２降幅较慢而高于浙农９６６     

辣椒死蔸的原因及防治

我市辣椒栽培面积较大,近年来一直稳定在100hm2左右.由于连年种植,加上管理措施不当,死蔸现象时有发生.一般年份死蔸率在20%左右,严重时可达50%以上,个别田块甚至连片死亡,造成绝收.为了摸清辣椒死蔸的原因,制定出切实有效的综合防治措施,确保辣椒稳产高产.多年来,我们一直坚持深入实地作调查研究,对此病的病因、症状和发病规律等进行了详细观察和分析,并进行了综合防治试验.现将调查和试验结果分述如下.     

菌落PCR产物直接测序方法的建立及在水稻基因测序中的应用

 建立了以菌落PCR 产物作为DNA 测序模板进行快速测序的技术方法。研究结果表明，采用菌落PCR技术，以载体插入位点两端序列互补的通用引物(如M13正反向引物)为引物，在控制菌落PCR反应条件的情况下,不仅可用于筛选和鉴定阳性克隆，而且菌落PCR 产物还可作为DNA 测序模板，结果准确可靠。与常规质粒测序方法比较，该法快速、简便，但对具有PolyT、PolyA过多的序列进行测序时，该法测序效率较低。     

1个新水稻组成型启动子的克隆与功能鉴定

根据基因芯片数据库和RT-PCR验证得到1个高活性的水稻组成型表达基因(TIGR Locus:LOC-Os07g34589),用PCR技术从籼稻品种明恢63基因组中克隆得到其上游启动子PSUI1,长度为1 941bp;将其与β-glucuronidase(GUS)报告基因融合构建植物表达载体DX2181b-PSUI1,利用玉米Ubiquitin启动子融合GUS报告基因构建表达载体DX2181b-PUbi作为对照,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将DX2181b-PSUI1和DX2181b-PUbi转化粳稻品种中花11。组织化学染色表明,含DX2181b-PSUI1的转基因植株中,GUS基因在幼苗期叶片、叶鞘、根,抽穗期叶片、叶鞘、茎秆、颖壳、雄蕊和成熟期的叶片、叶鞘、茎秆、胚、胚乳中均有表达,说明PSUI1为组成型启动子。对GUS表达活性进行定量分析表明,PSUI1启动子的活性约为玉米Ubiquitin启动子活性的1/3～1/2,但是PSUI1表现出了更好的表达稳定性。     

水稻叶片生育过程中Rubisco活化酶及其与Rubisco和光合速率的 …

水稻叶片生育过程中Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶、Ｒｕｂｉｓｃｏ和光合速率的动态变化研究表明,Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶、Ｒｕｂｉｓｃｏ活力和光合速率密切相关,Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶活力和光合速率的相关系数分别是０．９６８７（浙农９５２）和０．９５４５（浙农９６６）;高产品种浙农９５２的水稻叶片中Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶含量一直较高;尤其是生育后期,剑叶开始衰老,浙农９５２的Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶含量下降较浙农９６６慢。     

油菜素内酯对黄瓜苗期叶片光合机构调节作用的研究

 0.1 mg· L ^{- 1}油菜素内酯( EBR) 处理黄瓜叶片后能显著提高净光合速率( Pn) , 其效应可持续一周。EBR 处理对叶片叶绿素含量和气孔限制值(l) 无明显影响, 但显著提高了表观量子效率(AQY) 、羧化效率(CE) 、Rubisco最大羧化速率(V_c,max ) 和RuBP最大再生速率( J_max ) 。EBR还通过增加PSⅡ反应中心开放程度( qP) 从而提高PSⅡ光合电子传递量子效率(Φ_PSⅡ) , 但不影响天线色素的光能转化效率( Fv'/Fm') 。     

黄瓜硝酸还原酶cDNA片段的克隆及其在缺氮胁迫下的表达

以黄瓜叶片总RNA为模板,应用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR),首次扩增出黄瓜硝酸还原酶(NR)cDNA部分片段。经过测序和同源性分析表明:该基因片段长度为395 bp,与GenBank上所登录的笋瓜NR基因同源性达89%,根据所测序列推导该片段由131个氨基酸残基组成。进一步检测其在缺氮胁迫下的活性和表达变化,结果表明缺氮胁迫下硝酸还原酶的活性和表达都明显下降,推测黄瓜NR在转录水平上调节其活性。     

水稻大规模质粒测序影响因素分析

以水稻cDNA克隆为材料,讨论了应用MegaBACE 1000 DNA分析系统进行大规模质粒测序的特点,并着重对影响大规模质粒测序效果的相关因素进行了分析,认为质粒DNA的质量是影响测序效果的决定性因素,而同一批测序反应中保证各反应终产物的均一性是提高大规模测序成功率的关键。