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试验旨在优化新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的原核表达系统,并评价sσB蛋白的免疫原性。根据已测得的NDRV-XX的σB蛋白基因序列,在不改变氨基酸序列的前提下,按照大肠杆菌密码子偏好性对σB蛋白全基因进行优化、合成并连接至pET-32a(+)质粒中,构建原核表达重组质粒pET-32a(+)-sσB,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并优化表达条件。SDS-PAGE结果显示,最佳诱导表达时间、温度及IPTG浓度分别为3h、32℃和0.25mmol/L;可溶性分析结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。表达菌经超声破碎、变性、复性和Ni 2+柱亲和层析后,得到纯度高于90%的sσB可溶性蛋白,sσB重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株上的表达量较σB蛋白提升了14.6%,前者占细菌总蛋白量的32.3%。Western blotting结果显示,sσB重组蛋白具备NDRV抗原免疫反应原性。本试验成功构建并优化了NDRV-XX株σB蛋白的原核表达系统,提高了σB蛋白的表达量,并获得具有良好NDRV抗原免疫反应原性的σB重组蛋白,为后续NDRVσB蛋白功能及其应用的深入研究、基因工程疫苗的研发奠定了基础。 相似文献
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为研究近年国内的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)流行株与传统疫苗株(Mukteswar、La Sota及Clone 30)的亲缘关系和遗传演化情况,试验从广东、广西和海南地区患病的免疫鸡群病料中分离鉴定得到4株NDV流行株。通过RT-PCR技术对各毒株的F和HN基因进行扩增、克隆与序列分析,然后与GenBank上发表的NDV序列进行同源性比对、遗传进化树分析,并测定各毒株致病指数。结果显示,本试验中HN-08株的鸡胚半数感染量(EID50)、平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉致病指数(IVPI)分别为10-8.37/0.2 mL、58.5 h、1.78和2.45,XX-08株分别为10-6.50/0.2 mL、75.0 h、1.61和2.41,YS-09株分别为10-7.75/0.2 mL、64.5 h、1.71和2.38,LF-09株分别为10-7.60/0.2 mL、63.8 h、1.84和2.38。4株鸡源NDV流行株彼此间F和HN基因推导的氨基酸序列同源性在95.8%以上,与鸡源流行株GX11/03、GM株的同源性为96.8%~98.6%,而疫苗株Mukteswar、La Sota及Clone 30株的同源性为86.7%~90.6%,与标准强毒株F48E9的同源性为88.4%~91.3%。表明4株NDV流行株均为强毒株,与近年来国内流行的GX11/03、GM株有较近的亲缘关系,而与传统疫苗株的关系相对较远。 相似文献
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2011—2015 年我国南方地区PEDV 分子流行病学调查及S 基因遗传变异分析 总被引:1,自引:0,他引:1
应用RT-PCR方法对南方地区五省(广东、广西、福建、四川、江苏)18个猪场7日龄以内发病仔猪的小肠组织和粪便样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测,对9个猪场进行为期5年的动态监控,并对2011-2015年期间分离的35个PEDV流行株的S基因进行测序,与GenBank中的PEDV参考序列进行比较,并绘制了系统进化树.结果显示,上述地区五省存在Group1和Group 2两种类型毒株.Group1与美国、韩国毒株较为接近,可分为G1-1、G1-2、G1-3和G1-4等4个亚群,Group 2与2004年国内分离毒株较为接近,可分为G2-1、G2-2两个亚群.25个中国南方地区毒株集中于G1-2和G1-3,而另外8株与2004年国内毒株(JS-2004-2)同属G2-2亚群.不同类型的毒株引发的PEDV临床表现及死亡率不同,G2-2亚群的毒株引发的PED相对缓和,死亡率较低且病程较短,而位于G1-2和G1-3亚群(尤其是G1-3)的毒株则引起大规模急性暴发,病程较长,死亡率较高. 相似文献
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为监测畜禽饮用水中铅离子的含量,对畜禽养殖场的饮用水质量进行评价,本文建立了一种基于普鲁士蓝/石墨烯修饰电极的检测畜禽饮用水中铅离子的方法.采用电化学沉淀法使石墨烯表面附着普鲁士蓝纳米颗粒,并对制备的修饰电极使用差分脉冲伏安法进行化学性质分析,以及检测铅离子在所制备的电极表面的灵敏度、稳定性和检出限,评估了试验所制备的... 相似文献
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文章根据项目中所给出的跨越架总体结构型式及截面尺寸,建立跨越架三维实体仿真模型,对其进行必要的模型简化和有限元网格划分,确定约束条件和载荷关系。仿真分析中,清楚的以数据或图像的形式,描述立柱结构变形及防护网在受到冲击荷载过程中的具体变形情况。 相似文献
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为综合评价公猪精液质量,研究公猪精液质量参数和精子形态参数的品种差异,并探讨公猪精液质量随年龄的变化规律,选取杜洛克、长白和大白公猪共114头,采用一般线性模型,以品种和年龄为固定因素对其精液质量参数、精子形态参数进行多变量分析。结果显示,杜洛克公猪的精子密度(619.20百万个/mL)显著(P0.05)高于长白公猪(363.18百万个/mL)和大白公猪(336.92百万个/mL);杜洛克与大白公猪的精子活力和直线运动率均显著高于长白公猪(P0.05);长白公猪精子正常形态率(92.95%)显著(P0.05)高于杜洛克公猪(90.78%);1年龄的公猪精子密度(556.98百万个/mL)显著(P0.05)高于2、3年龄(382.44百万个/mL、373.32百万个/mL);大白公猪精液的弯尾率、卷尾率均显著(P0.05)低于杜洛克公猪和长白公猪,长白公猪的精子近端质滴率(2.28%)显著(P0.05)低于杜洛克公猪(3.94%)和大白公猪(2.92%),3年龄的公猪精子近端质滴率显著(P0.05)低于2年龄;在正常精子形态参数方面,杜洛克公猪和大白公猪精子的头部长度、尾巴长度均显著高于长白公猪(P0.05),杜洛克公猪(2.96μm)和长白公猪(2.94μm)精子的头部宽度均显著(P0.05)高于大白公猪(2.87μm),杜洛克、大白、长白公猪精子的头部周长依次降低且彼此间差异显著(P0.05),长白公猪精子的头部面积/总精子长度显著(P0.05)高于大白公猪,长白公猪的头部宽度/头部长度显著(P0.05)高于杜洛克公猪和大白公猪,1、2年龄的公猪精子头部长度、头部周长、头部长度/总精子长度、头部长度/尾巴长度均显著(P0.05)高于3年龄,1、2年龄的公猪精子尾巴长度/总精子长度和头部宽度/头部长度均显著(P0.05)低于3年龄。综上,杜洛克公猪常规精液质量参数最优,其次为大白公猪和长白公猪,但其精子形态参数相比于长、大白公猪较劣。年龄因素对公猪精液质量影响不显著。 相似文献
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为了研究新致病型番鸭呼肠孤病毒(N-MDRV)对雏番鸭的致病性,试验利用N-MDRV SH12和DH13株分别感染1日龄雏番鸭,并设对照组(肌肉注射生理盐水),第1,3,7,11,14天后测定血清中白细胞介素(IL)-4、IL-10、肿瘤坏死因子(TGF)-β、干扰素(IFN)-γ的含量及免疫器官指数,并观察试验组及对照组鸭群临床症状、剖检病变及病理组织学变化。结果表明:感染后第7天部分试验鸭明显消瘦,剖检可见肝脏坏死、出血,脾脏肿大、坏死,法氏囊萎缩(SH12组)或坏死出血(DH13组)。肝脏、脾脏、法氏囊(DH13组)正常结构被破坏,坏死灶内有大量红细胞和单核细胞浸润,感染后期脾脏可见肉芽肿。免疫器官指数与对照组比较均无显著差异(P0. 05),但感染后第7天试验鸭血清中IL-4、IL-10、TGF-β、IFN-γ含量均高于对照组,且DH13组IL-10、IFN-γ含量显著高于对照组(P0. 05);感染后期部分试验鸭的IL-4、IL-10、TGF-β、IFN-γ含量均有所恢复,但其整体水平仍高于对照组。说明N-MDRV感染可导致雏番鸭免疫器官的淋巴细胞含量明显减少,血清中IL-4、IL-10、TGF-β、IFN-γ含量增多与N-MDRV株致病性和免疫抑制相关。 相似文献