一株H3N2亚型猪流感病毒株的分离鉴定及对猪的感染性研究

为探究猪流感病毒(SIV)黑龙江分离株的基本特性,本研究将2007年从黑龙江省某猪场采集的鼻拭子样品接种10日龄SPF鸡胚进行病毒分离,经微量血凝试验、HA和NA基因RT-PCR扩增并测序确定其病原特异性,与Gen Bank已登录的序列进行比对分别分析HA和NA基因序列的同源性,进行动物回归试验确定该分离病毒对猪的致病力。结果显示,接种鼻拭子样品的SPF鸡胚尿囊液有凝集鸡红细胞的活性,经RT-PCR扩增出H3和N2目的基因片段,HA基因序列(HM765432)与A/swine/Korea/CAS07/2005(H3N2)(EU798791)的HA基因序列同源性为98%,NA基因序列(HM765434)与A/swine/Korea/CAS09/2006(H3N2)(EU798832)的NA基因序列同源性为98%,结果表明分离株为H3N2亚型SIV。动物回归试验结果显示,该分离病毒能够使80%猪发病,且与临床发病猪的症状类似,表明该分离病毒对猪具有较强的致病力,有望成为H3N2亚型SIV疫苗效力评价用效检病毒株。     

猪感染牛病毒性腹泻病毒研究进展

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)和猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、绵羊边界病毒(Border disease virus,BDV)同属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)[1],而且在血清学上具有一定的交叉反应,它们所引起的传染性疾病给各国养牛、养猪和养羊业造成了严重的危害。牛病毒性腹泻病(BVD)呈世界性流行,给各国养殖业造成了严重的经济损失[2]。但直到2012年,世界动物卫生组织(Office International Des     

铁死亡在细菌性感染中的研究进展

铁死亡是一种新型程序性细胞死亡模式，其主要特点为铁依赖的脂质过氧化物蓄积。在细菌感染宿主细胞的过程中，铁代谢紊乱和氧化应激起到了重要作用，并且已经证明某些细菌可通过铁死亡的方式诱导宿主细胞死亡。本文就细菌感染对宿主铁代谢的影响以及细菌诱导铁死亡的研究现状进行阐述，以期为防控动物细菌感染提供新的思路。     

阿尔泰山西伯利亚落叶松育苗技术

西伯利亚落叶松是阿尔泰山林区主要乡土树种之一,本文从整地作床、容器选择、育苗基质、种子处理、播种、移植芽栽、苗期管理、炼苗、苗木越冬、出圃全过程总结在阿勒泰林场进行西伯利亚落叶松营养杯育苗技术,以期为缩短针叶树种苗木繁育时间、开展营养杯育苗提供技术参考。     

猪TLR4基因在F18大肠杆菌抗性型和敏感型资源群体间的差异表达分析

本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平,为探讨该基因在免疫识别和F18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首先,各取8头35日龄F18大肠杆菌抗性型和敏感型苏太仔猪组织样,包括心脏、肝脏、脾脏等11个组织,提取总RNA,以GAPDH基因为内参基因,进行实时荧光定量PCR。对TLR4基因mR-NA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算TLR4基因mRNA在各个组织以及F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间表达量。结果显示,TLR4 mRNA在猪各种组织中广泛表达,在肺、淋巴结、肾脏和脾脏等免疫器官中表达量较高,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量普遍高于抗性型个体的表达量,在各个组织中(除胃外)TLR4表达量差异倍数从1.083到2.980不等;在肺、淋巴结、肾脏和胸腺组织中,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量显著高于抗性型个体的表达量(P<0.05)。本研究结果表明,TLR4基因通过天然免疫识别机制对猪F18大肠杆菌病等革兰氏阴性疾病有一定的影响,TLR4基因表达量...     

重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究

以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamH Ⅰ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M).通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响.结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变.突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失.生长曲线的测定结果表明,与舍pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢.以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC084-hok/sok(M).重组质粒pAqCYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性.     

鸡副粘病毒病防制的探讨

新城疫病毒是禽副粘病毒Ⅰ型唯一的成员 ,在许多教科书及研究论文中均认为水禽有甚强的抵抗力 ,不引起感染发病。但鹅副粘病毒病的发生已被江苏省的王永坤和广东省的辛朝安两位教授所发现。鹅副粘病毒病的出现大大增加了新城疫防制的难度。１禽副粘病毒病流行概况自１９２６年在印度尼西亚的巴塔维亚和英国的新城发现并分离到新城疫病毒 ,该病至今还在全世界流行发生。在７０多年中全世界新城疫病毒曾发生几次大流行。第一次大流行从１９２６年至６０年代初期 ,在３０余年中从印度尼西亚和英国传播到世界各国 ,造成养鸡业的严重损失 ;第二次…     

猪BPI蛋白重组载体的构建及真核表达

试验旨在构建猪BPI真核表达载体,获得猪源BPI重组蛋白.根据GenScript's CloneEZ^® PCR Cloning Kit试剂盒,将BPI编码序列克隆至pUC57载体上,酶切与测序鉴定无误后,将重组质粒pUC57-BPI转染293-6E细胞,并利用SDS-PAGE和Western blotting方法检测其表达水平.结果显示,本试验成功构建了猪源BPI蛋白真核表达载体pUC57-BPI,并在293-6E细胞培养上清中检测到猪源BPI重组蛋白的表达.该猪源BPI重组蛋白体外表达系统的建立为今后深入研究猪BPI的生物学功能以及猪抗菌蛋白的制备提供了试验基础.     

感染大肠杆菌F17湖羊羔羊脾脏中差异circRNA分析

【背景】羊大肠杆菌病是一种以剧烈腹泻和败血症为特征的急性传染病,是规模化羊场最为常见高发的细菌性疾病之一,尤其是初生羔羊易被产肠毒素大肠杆菌（ETEC）感染,引起羔羊腹泻,又叫羔羊白痢,使养殖场遭受严重的经济损失。而传统的抗生素治疗方案存在诸多缺陷。【目的】 本研究通过让湖羊羔羊口服大肠杆菌 F17菌株获得不腹泻和腹泻的羔羊个体,筛选出服用大肠杆菌F17菌毛后不腹泻与腹泻型个体中差异表达的circRNA,进而探究circRNA在绵羊抗腹泻中的作用,从而发现与抗大肠杆菌病性状相关的候选基因。从circRNA层面上,加深对绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的认识,确定绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的功能基因。【方法】用CIRI软件从头预测circRNA,利用RNA-seq技术,首次筛选出感染大肠杆菌F17菌株后不腹泻与腹泻型羔羊个体脾脏中差异表达的(DE)circRNA,对差异表达转录本进行GO富集分析,结合GO注释结果对其功能进行描述。统计每个GO条目中所包括的差异转录本个数,并用Fisher's exact test计算每个GO条目中差异转录本富集的显著性。然后随机选择6个DE circRNA,利用q-PCR分别验证这6个DE circRNA在不腹泻和腹泻组羔羊脾脏内的相对表达水平,进而利用Miranda软件来预测与miRNA结合的circRNA以及miRNA的靶基因,根据miRNA靶基因的功能注释来阐明此部分circRNA的功能,分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,最后用q-PCR验证circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平。【结果】 绘制参考序列后,鉴定出已知的7 730个circRNA,DE circRNA与GO 数据库进行比对,发现一共有60条circRNA被注释和分类到297个功能亚类中。利用RNA-seq在不腹泻和腹泻羔羊脾脏中筛选出60个差异表达的(DE) circRNA,其中31个上调和29个下调,用q-PCR验证随机选择的6个DE circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结果一致。利用Miranda分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,发现6个circRNA、5个miRNA和8个mRNA之间存在一定的靶标关系,用q-PCR验证mRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结果一致。【结论】 探究了对于不腹泻和腹泻羔羊脾脏中circRNA的表达谱,进一步了解其在绵羊抗病发生过程中的调控作用。发现了不腹泻和腹泻羔羊脾脏中差异表达的circRNA,有助于找出羔羊如何抵抗腹泻的发生机制,为羔羊抵抗腹泻提供科学的依据。