TAC载体介导温敏不育水稻的遗传转化

选用两系杂交稻的母本——温敏不育系籼稻Oryza sativa品种安农S-1、安湘S和香125S为试验材料,对这3个品种的组织培养特性进行了研究．结果表明：香125S的胚性愈伤组织最容易形成,状态也最好．以含有50kb水稻基因组片段的TAC27克隆(GLA40)和农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株LBA4404组合,转化水稻胚性愈伤组织,获得了大量转化苗,通过潮霉素溶液浸泡试验,全部转化苗均表现抗性;PCR检测,证明TAC27所携带的50kb的外源片段已经完整地整合到水稻基因组上．     

作物海藻糖合成相关基因的研究进展

海藻糖是一种非还原性二糖,广泛存在于自然界各种生物中。随着海藻糖代谢途径的发现,人们逐渐重视对海藻糖及其中间产物海藻糖-6-磷酸（trehalose 6-phosphate,T6P）的研究。T6P是糖信号重要标志,也是植物生长发育必不可少的组成部分。海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthases,TPS）催化T6P的生成,然后在海藻糖-6-磷酸磷酸酶（trehalose-6-phosphate phosphatase,TPP）催化作用下发生去磷酸化反应生成海藻糖。海藻糖合成相关基因在植物生长发育、逆境调控中具有重要作用,本文对海藻糖合成及作物中相关基因的功能进行了总结。     

几个光温敏核不育水稻品种组织培养特性的研究

选用了两系杂交稻的母本光温敏核不育系籼稻品种培矮64S、粳稻品种农垦58S和7001S作为材料，对其在组织培养中愈伤组织诱导和植株再生进行了比较研究，结果表明，不同水稻品种和不同外植体状态在愈伤组织诱导上有较大的差异，对籼稻品种而言，幼胚愈伤组织诱导率明显高于成熟胚；而对粳稻品种而言，幼胚与成熟胚愈伤组织诱导率没明显差异．培养基种类对愈伤组织诱导影响不大，但对愈伤组织状态有显著影响．培矮7001S使用MB培养基较好；农垦58S和7001S使用NB培养基较佳．籼稻品种植株再生率明显低于粳稻品种．愈伤组织断代超过3个月，再生频率下降．     

水稻蜡质合成相关基因 OsCER4 自身启动子驱动的反义RNA转化植株获得

水稻OsCER4基因编码脂肪醛脱羧酶,与拟南芥CER1基因高度同源,是否参与植物表面蜡质合成尚不清楚,为了探讨其功能,扩增了OsCER4基因起始密码子ATG上游约2 kb的序列作为该基因的启动子,以常规技术将启动子和OsCER4基因反义片段克隆到pCAMBIA双元载体1380中,采用农杆菌介导法转化粳稻品种中花11,并进行了转化苗OsCER4蛋白的表达量变化分析.结果表明,成功构建了由OsCER4自身启动子驱动的反义RNA载体,并通过农杆菌介导法成功转入水稻中花11中,多数OsCER4基因反义转化植株为阳性转化植株,后代分离比符合3∶1,反义RNA转化植株在蛋白水平上的表达量下降.     

植物细胞工程实验课教学经验初探

本着培养具有较强实验能力和较高科学素质的创新型人才的目的,我们在植物细胞工程实验课的教学过程中精心设计实验,重视实验准备过程,改变传统教学模式,力求使学生掌握植物组织培养和细胞工程研究的基本技能和实验技术,熟悉有关的研究方法,提高分析问题和解决问题的能力,为今后独立进行科研工作或从事开发性工作打下坚实的基础。实践证明,这样做不仅能培养学生的思考能力、动手能力、多学科综合能力和协作精神,同时对科学素质的培养也起到了重要作用。     

水稻TAC基因组文库的筛选与克隆转化

利用一个cDNA片段筛选了水稻品种台中65 TAC27基因组文库,获得一个阳性克隆,将该阳性克隆转化水稻温敏核不育材料7001S并获得转化苗,转化苗经PCR检测,证实外源基因已整合到水稻基因组中。     

农杆菌介导水稻转化条件的优化

应用TAC（transformation-competition artificial chromosome)载体和pCAMBIA1300分别与农杆菌LBA4404组合转化水稻成熟胚愈伤组织，探索了农杆菌转化的有关因素。结果表明：共培养培养基上铺上1张滤纸有利于控制农杆菌的过度生长；粳稻品种转化率明显高于籼稻；干燥处理能有效杀死农杆菌，并有利于提高转化率，预再生可提高抗性愈伤组织的再生率而提高转化率。     

转 AtPAP15基因大豆种植对根际土壤养分及酶活性的影响

以转入AtPAP15基因的两个磷养分高效转基因大豆株系AP15-1、AP15-3及其各自受体YC03-3、YC04-5为材料,在大田连续种植两季,通过在苗期、盛花期和成熟期采集根际土,对其进行pH和全磷、速效磷、有机磷、全氮、碱解氮、全钾、速效钾、及钼等八种微量元素含量的测定,并分析了盛花期AP15-1与其受体YC03-3根际土中酸性磷酸酶、过氧化氢酶、蔗糖酶和脲酶的活性变化,从而了解上述磷高效转基因大豆的种植是否会对根际土中主要养分和酶活性产生影响.研究结果显示:秋春两季根际土中除全钾和微量元素含量外,其他养分含量在个别时期,转基因大豆AP15-1或AP15-3与其受体之间,均存在显著性的差异,但这些显著性差异大部分出现在苗期,成熟期仅有机磷含量在AP15-1与其受体YC03-3、速效钾含量在AP15-3与其受体YC04-5之间呈显著差异,并且这些差异在两季中均未重复出现.根际土中四种土壤酶活性测定结果显示:同季转基因大豆与其受体之间差异不显著.总体结果表明,上述转AtPAP15基因磷高效大豆种植对根际土中磷、氮、钾等养分和四种土壤酶活性均未产生显著的影响.     

转基因番木瓜“华农一号”事件特异性定性PCR检测方法的建立

以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番木瓜基因组序列的2套特异引物,对"华农一号"进行检测,证明其可特异地把"华农一号"从转基因番木瓜品系中检测出来;2对引物的检测灵敏度都可以达到0.05%的标准,高于欧盟0.9%的检测要求;利用2对特异引物对"华农一号"的果肉、果皮、种子进行检测,可得到特异性良好的扩增.