优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文)

[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用SDS法和改良CTAB法(包括低温操作、增加酚氯仿的抽提次数以及延长低温沉淀时间等)提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再使用普通聚合酶与热启动高保真的ExTaqHS聚合酶进行两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。油菜数据库比对搜索采用BBSRCBrassicaDB上WU-BLAST2.0工具,拟南芥数据库比对分析采用TAIR数据库中WU-BLAST2.0工具。为验证FS4转基因中T-DNA插入位点的真实性,根据序列比对分析结果在T-DNA插入位点的左右两端分别设计引物FS4-L与FS4-R。分别采用3对引物pS2/FS4-L、pA2/FS4-R、FS4-L/FS4-R同时对T1代转基因FS4杂合体和非转基因对照植株的基因组进行PCR验证。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。     

猪传染性胸膜肺炎的PCR快速诊断及基因组酶切分析

为了建立猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionbacillus pleuropneumoniae,APP)快速PCR诊断方法,试验依据APP的毒素基因Apx ⅣA的序列设计引物,对江西农业大学动物科学技术学院预防兽医学教研组保存的4个血清型APP菌株以及大肠埃希杆菌、沙门杆菌进行PCR扩增,同时对提取的4个血清型菌株的基因组DNA用EcoRⅠ酶切。结果表明:4个APP菌株均成功扩增出预期大小的基因片段,而其他G-菌没有扩增出;4个血清型菌株的基因组DNA经EcoRⅠ酶切后酶切片段有所不同。     

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的RT—PCR应用和分析

为大致了解郑州市猪繁殖与呼吸综合征的流行趋势和疫情动态，从该地区部分大中型猪场采集临床样品，以Nsp2缺失（1597-1680）变异株为模板设计引物，利用异硫氰酸胍法提取RNA，应用RT—PCR技术检测PRRSV并对其分子流行病学进行分析。结果显示，从该地区20家猪场（发病状态猪场10家，正常状态10家）采集300份样品进行检测，发病状态猪场感染率100％，正常状态猪场感染率70％，同时以美洲株为模板进行扩增，结果全部阴性。     

牛肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的分子结构与特性研究

本试验分离了编码肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的全长cDNA,用生物信息学分析其基因结构、功能、进化关系、并预测其结合位点及三维结构。实时定量PCR(Q-PCR)结果发现,TWEAK和FN14在牛的多种组织中为组成型表达。用酵母双杂交对牛TWEAK和Fn14的相互作用进行了分析,结果发现,TWEAK-FN14通路在进化上高度保守。这将有助于开展TWEAK/Fn14系统在这个重要动物模型中的生物学作用的研究从而对TWEAK和Fn14家族的分子进化进行更深入的了解。     

荧光分光光度法测定佛手维生素B1

采用荧光分光度法对金华佛手ＶＢ１的测定进行了研究。样品经柱层析处理、洗脱，再利用硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素，经正丁醇萃取、而后测定提取溶液中的硫胺素的含量。实验对该法的精确度、准确性进行了研究、变异系数５．７。     

一种油罐底板实时监漏的新方法

针对当前被广泛使用的通过罐内油位变化和感官查库对油罐底板进行实时监漏的方法存在的弊端,提出了油罐底板实时监漏的新方法,即油罐基础内钻孔油气体积分数监漏法.介绍了油罐底板实时监漏方法的探漏原理:在油罐基础上按每9m(弧长)钻取一个直达砂垫层的探漏孔,使用高灵敏度的油气含量检测仪探测到油气,可判断罐底是否发生渗漏.以实例阐述了操作步骤和现场应用情况,证明了其有效性,详述了其技术要求.基于现场实验数据,提出了汽油油罐的判漏标准,可为今后油库的扩容和改造提供借鉴.     

森林着火面积的实时测定

森林着火后 ,需快速、准确地测定过火面积 ,进而进行损失评价。常用的方法有 :( 1)图上求积仪测定面积。需依据仪器测量或目估描绘过火森林边界 ,而后在室内通过求积仪确定面积。确定面积的精度与过火森林边界的描绘精度有关。采用罗盘仪时 ,测定面积的精度大约为1/ 50。目估描绘时大约为 1/ 30或更低 ,其结果难以进入ＧＩＳ ,每次只能测定 3ｈｍ2 面积。( 2 )罗盘仪数字测定面积。采用电子罗盘仪或普通罗盘 ,配合野外电子记录手簿 ,可实现实时测定 (Ｒｅａｌ -ｔｉｍｅｓｕｒｖｅｙ)。测定面积的精度一般可达1/ 50～ 1/ 10 0 ,其结果易进入…