猪伪狂犬病毒HN-LD株分离鉴定及部分毒力基因遗传进化分析

为了解湖南省伪狂犬病毒（PRV）病原特征及遗传变异情况,从湖南娄底某猪场采集疑似感染伪狂犬病（PR）病料,通过细胞传代、PCR鉴定、间接免疫荧光试验（IFA）等进行病毒分离鉴定;对该毒株的gC、TK和gE基因进行PCR扩增及测序,分析其变异情况。结果表明,临床病料接种PK15细胞后有1份样品出现细胞病变,经过PCR和IFA鉴定结果表明分离的毒株为PRV（命名为HuN-LD株）,盲传第6代病毒的滴度为10^7.5 TCID₅₀/mL。与参考PRV毒株相比,该毒株gE、TK和gC基因序列与国内流行变异株对应序列同源性最高,与其他毒株同源性相对较低。基于gC基因序列构建的系统进化数分析结果表明,该毒株与国内2011年后流行变异株亲缘关系最近,属于同一分支,但与国外流行的毒株（NIA3和Becker等）相隔较远,属于不同分支。提示成功分离得到1株PRV变异株,该结果可为湖南省PRV流行病学研究及疫苗研发等提供科学依据。     

内质网分子伴侣GRP94对伪狂犬病毒增殖的调节作用

为探究葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,以及GRP94与PRV结构蛋白之间的相互作用。利用慢病毒转染构建GRP94基因过表达的BHK-21细胞,以及CRISPR/Cas9技术构建GRP94基因敲除的BHK-21细胞,检测PRV感染不同细胞的增殖水平,比较内质网应激相关蛋白表达水平,探索GRP94与PRV结构蛋白之间的互作关系。结果表明,GRP94基因过表达细胞株显著有利于PRV增殖,而GRP94基因缺失细胞株对PRV增殖无显著影响。蛋白免疫印迹结果显示,在GRP94基因缺失细胞株中,GRP78表达水平显著上调。免疫共沉淀结果表明,GRP94与gB、gD、gL具有相互作用。GRP94基因过表达有利于PRV增殖,检测未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)相关蛋白,研究GRP94在病毒增殖过程中的具体作用,可为PRV与内质网应激提供分子方面的研究基础,于对抗PRV病毒的感染具有重要意义。     

猪场的猪伪狂犬病免疫及净化策略

猪伪狂犬病已成为危害全球养猪业最严重的传染病之一.经对黄冈地区25个规模猪场的727头猪进行调查,猪群伪狂犬病的阳性率为20%～40%,呈比较严重的流行态势.可使用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗进行免疫预防,并通过生物安全措施等预防、根除猪伪狂犬病.     

湖南首例奶牛伪狂犬病的诊断和防制

报告了湖南省首例奶牛伪狂犬病，动物感染试验，兔体免疫保护试验，免疫琼扩试验以及病毒分离与鉴定证实了临床诊断，兔体免疫保护试验不表明，闽Ａ株病毒疫苗对湖南分离株伪狂犬病毒有交叉保护作用。     

用荧光相图法研究胃蛋白酶的去折叠过程

蛋白质折叠机理的研究是基因重组蛋白质高效生产的前提条件,对于工业化生产重组蛋白以及治疗与蛋白集聚密切相关的疾病都有重要意义。为了探索一个统一的蛋白质折叠机理,用荧光相图法分别对脲和盐酸胍诱导的胃蛋白酶的去折叠过程进行了研究。结果表明,无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,当脲浓度为0~8.0 mol/L时,脲诱导胃蛋白酶的变性过程都符合"二态模型";而无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,当盐酸胍浓度为0~6.0 mol/L时,该蛋白的变性过程均符合"三态模型"。     

伪角蜡蚧的生物学特性研究

伪角蜡蚧(Ceroplastes pseudoceriferusGreen)严重危害多种园林植物,幼虫和成虫吸食寄主汁液,影响其生长和观赏价值。该虫在昆明一年发生一代,雌成虫4月中旬至5月上旬为产卵期,5月中旬始见初孵若虫,5月下旬为卵孵化高峰期,8月上旬进入成虫期,以雌成虫或老熟若虫越冬。准确预测该虫的卵期是防治该虫成败的关键,经恒温和室内变温饲养测定,卵的发育起点温度为9.46±1.23(℃)和10.33±1.01(℃),有效积温为296.94±22.10日度和319.04±20.29日度。其结果符合实际发生情况。     

Microarray-Based Detection and Differentiation of Virulent and Attenuated Pseudorabies Virus

DNA microchip used in this study was formed from miniature arrays of pseudorabies virus （PrV） gene-specific probes immobilized on a glass surface. Hybridization using DNA microchip （microarrays） was used for differentiation between virulent and attenuated PrV. The presence of four gene segments （gB, gD, gE~, and gE ） encoding conservative glycoprotein B （gB）, D （gD）, and E （gE） of PrV was monitored using multiplex PCR. The amplicons were labeled with Cy5 or Cy3 dyes followed by hybridization to the gene-specific capture probes on the microchip. The presence of gD and gB, gE~ gene fragments was shown in virulent （gE~ genotype） and attenuated PrV （gE genotype）, whereas gE- gene （deleted domain in gE gene） was demonstrated only in virulent, not in attenuated, virus. No cross-hybridization was observed when fluorescence labeled-PCR products of PrV were hybridized using capture probes of related viruses, such as porcine respiratory and reproductive syndrome virus （PRRSV）, porcine parvovirus （PPV）, Japanese encephalitis virus （JEV）, and porcine circovirus type 2 （PCV-2）. The assay was 10 times sensitive than gD gene-specific PCR. Overall, the results of this study suggested that the microarray might be very useful for detection and differentiation of virulent PrV from attenuated one.     

猪伪狂犬病的诊治

猪伪狂犬病(PR)又称狂痒病，是由伪狂犬病毒(PRV)引起的传染性疾病。在成年猪以呼吸系统和繁殖障碍，在哺乳仔猪以中枢神经系统的损害为临诊表现；牛、羊、猫、狗以及野生动物均可感染发病，以发热、中枢神经系统症状并伴有身体某部位的奇痒为病征。1902年匈牙利学者Aujezky氏首先作了报道，     

伪狂犬病病毒gE囊膜糖蛋白主要抗原表位区基因的原核表达

参照GenBank上公布的伪狂犬病病毒gE基因序列设计1对引物,通过PCR方法扩增一段包含gE主要抗原表位编码区的564 bp的片段,扩增产物克隆于pMD18-T vector中,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游,构建的原核表达质粒pET-gE在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示:表达产物分子质量为38 ku,以包涵体的形式存在,表达产物用His亲和层析柱进行纯化。Western blotting分析表明:该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应。结果证明该表达产物具有生物学活性,可作为鉴别诊断的抗原。     

三元配合物及其在分析化学中的应用

六十年代,人们发现一种或两种有机配体参与形成的三元配合物具有许多优越的分析特性。以这种三元配合物反应为基础的分析方法在灵敏度、选择性及准确度方面均较一般方法有明显提高。近二十多年来,由于有机配剂和配位化学的发展,三元配合物在分析化学中得到了广泛研究和应用。本文详细阐述了三元配合物的主要类型,分析特性及其在分析化学中的应用。