绿茶DNA提取方法及分子鉴定的初步研究

以绿茶为原料,通过改进的CTAB方法来提取分离绿茶总DNA,实验表明,所采用改进的CTAB 微量提取DNA法,可以得到高质量的绿茶总DNA,1.0 g茶样DNA含量在101～498 μg/g之间,平均249 μg/g。采用ISSR分子标记对10个绿茶产品进行鉴定,结果表明ISSR标记能有效地区别不同的绿茶产品,为进一步研究绿茶分子鉴定技术提取了参考依据。     

杏ISSR反应体系的建立

为建立杏适宜的ISSR反应体系,以红玉杏为试材,探讨影响ISSR扩增的主要因素包括模板浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度、引物浓度及循环次数。通过筛选及优化,确定杏ISSR的适宜扩增条件。结果表明,在25 μl PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为：模板1 μl（40 ng）、dNTPS 2.5 μl（2.5 mmol/L）、Taq DNA聚合酶0.5 μl（2.5 U）、引物1 μl（20 μmmol/L）、10×PCR Buffer 2.5 μl、MgCl2 2.5 μl（2.5 mmol/L）、ddH2O 15 μl,反应循环次数40次。同时利用建立的ISSR反应体系对3种普通杏品种进行扩增,证明该体系完全适合此标记对杏不同品种的遗传分析,从而为下一步杏资源遗传多样性的研究提供理论依据和参考价值。     

云南马铃薯地方品种‘转心乌’实生群体遗传多样性的ISSR分析

本研究采用ISSR标记技术,从公开发表的文献中选取多态性丰富,稳定性好,重复性高的12条IS-SR引物对马铃薯品种‘转心乌’及其100个实生个体的遗传变异性进行研究。研究结果表明,12条引物共检测到77条带,其中每条引物检测到5～7条带,平均每个位点的等位基因变异数为6.4条;多态性条带数为43条,多态性比例为55.84%。供试材料间的遗传相似系数的变异范围介于0.78～0.96之间,在0.785处可将所有供试材料划分为3大类。UPGMA聚类分析结果表明,100个材料与母株相比,虽然遗传相似性很高,亲缘关系较近,但均有不同程度的变异,没有1个材料与母株在基因型上表现完全相同;实生群体内在分子水平上也没有检测到完全一致的两个个体,这表明要利用实生群体获得完全一致的群体有相当的难度。该结果也表明利用实生种子保存种质,不失为保存马铃薯遗传多样性的有效方法。     

石榴ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

现利用正交设计L16(45)探讨DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶对石榴ISSR-PCR反应体系的影响,首次应用加权平均法及百分制对正交实验结果进行评分,并应用DPS数据处理系统进行数据分析;同时对石榴ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验。结果表明:适合石榴的ISSR-PCR最优反应体系(25μL)为:Mg2+1.75 mmol/L、dNTPs0.15 mmol/L、TaqDNA聚合酶1 U、引物0.8 mmol/L、DNA模板20 ng;引物UBC 811的最适退火温度为51.2℃,且最适退火温度因引物而异。     

椰子ISSR遗传多样性分析

应用ISSR技术分析了来自多个国家的30份椰子品种或类型的遗传多样性。用29条多态性较好的引物共扩增出了157条条带,其中多态性条带110条,多态性比率70%;用NTSYS软件计算出这30份材料的DICE相似系数在0.548～0.962,平均值为0.788。其中相似系数最高的是红矮(14号)和杂交种(16号)为0.962,最低的是海南高种(29号)和斐济高种(5号)仅0.548。用UPGMA方法构建聚类树,所有材料在相似系数0.79处被划分为三大类(类群A,B,C)。A类群包括所有引进的高种、矮种和杂交种,B类群包含了除雄树以外的所有特殊变异类型椰子,而来自海南的所有高种单独聚为C类。综合研究结果表明我国海南的椰子种质资源多样性水平不高,需要进一步引进国外优良种质。     

丰花月季体细胞无性系变异的研究

以丰花月季腋芽为外植体进行芽分化诱导,将获得无菌苗用NaN3进行化学诱变以获得变异植株,用ISSR分子标记进行检测。结果表明,腋芽是诱导芽分化的很好的外植体,诱导率可达80%,分化率可达90.6%,诱导分化的苗强壮;半致死剂量200 mg.L-1 NaN3处理2 h可作丰花月季丛生芽的诱变处理;从遗传相似系数和聚类图总的结果表明,15个亲本材料间相似系数很大(0.97),说明本次参试材料的遗传差异性小,亲缘关系近。另外,在相应的材料之间,仍存在一定的差异,其相似性最高的为0.99,最低的为0.87,这表明运用ISSR技术可以灵敏地分析亲本材料的遗传背景,在体细胞无性系变异研究中具应用价值。     

ISSR Analysis of 26 General Species in Gladiolus hybridus Hort

ISSR analysis is applied in this study to research the classification and genetic relationship of 26 cultivars of G.hybridus Hort.Total 19 arbitrary primers screened from 100 primers were used for further PCR and diversity analysis.A total of 110 ISSR sites were detected with a mean of 5.63 fragments amplified for each primer.A total of 103 polymorphic DNA fragments were detected among all the 110 amplified fragments,which accounted for a high level of 93.6%of all and could be used to identify different cultivars.The results revealed that the idioplasm resource of G.hybridus Hort cutting flower cultivar had a narrow genetic basis on molecular level,and certain genetic relationship existed in summer large-flowers of G.hybridus Hort varieties.     

利用ISSR标记研究吉林省水稻品种的亲源关系

用ISSR标记对吉林省70个水稻种品种进行亲缘关系的研究。结果表明：（1）在130个引物中筛选出27个扩增后表现多态性的引物;（2）树状图和遗传距离的分析结果表明：丰优500、丰优516和吉粳73,吉粘3号、吉粘4号的亲缘关系的品种之间的遗传距离都比较近。说明ISSR标记结果与系谱分析结果是吻合的,可以将其应用于品种亲缘关系的研究和品种鉴定中;（3）ISSR标记结果将吉林省70个水稻种品种划分为5个亚群。     

瓠瓜ISSR—PCR反应体系优化

利用正交设计L9(34),对瓠瓜ISSR-PCR反应体系的4因素(dNTP、引物、Mg2 、Taq酶)在3水平上进行优化试验,建立适合瓠瓜ISSR-PCR反应体系,结果表明,在25μL反应体系中,含1×PCR buffer、200μmol·L-1dNTP、0.5μmol·L-1引物、2.5mmol·L-1 MgCl2、30ng模板DNA、0.75U的Taq酶为最佳处理;通过PCR梯度测验,瓠瓜ISSR扩增适宜的退火温度比Tm值高2~6℃。     

富贵竹种质资源遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对10份富贵竹(Dracaena sanderiana)材料进行了遗传多样性研究。从 36个引物中筛选出 8个有效引物,共扩增出125条带,其中多态性条带为69条,多态性比率为55.2%,遗传相似性系数范围在0.64～0.95之间。根据ISSR标记的结果,采用UPGMA聚类分析方法,可将供试材料分为3大类群。研究结果表明, 供试富贵竹材料的遗传多样性相对较低,迫切需要拓宽富贵竹的遗传基础。