雷氏普罗威登菌引致中华鳖脏器脓肿

江苏省某养殖场饲养的中华鳖发生败血症，特征为肺脏、脾脏等内脏广泛形成干酪样结节。从病鳖内脏分离到一种革兰氏阴性杆菌，兼性厌氧，丙氨酸脱羧酶阳性，利用柠檬酸盐、吲哚和甲基红反应均为阳性，发酵甘露醇、肌醇、甘露糖，产酸。经经鉴定为雷氏普罗威登菌（Providencia rettgeri)。药敏试验表明，该菌对羧苄青霉素、先锋霉素、SMZ＋TMP、氟哌酸、恩诺沙星敏感。以分离菌腹腔注射感染健康中华鳖，接种鳖1周后陆续发病死亡，并从其体内分离到同种细菌。     

嗜水气单胞菌J-1株粘附素及其受体分析

以EPC细胞和HEp-2细胞为细胞模型，用嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,Ah)J－1株进行粘附试验，同时以Ah4型菌毛的抗血清作粘附抑制试验，用以分析AhJ-1株的粘附素及其受体。EPC细胞粘附和粘附抑制试验证实，Ah J-1株粘附素受体具有甘露糖、胆固醇成分，有少量半乳糖成分，无葡萄糖成分。HEp-2细胞粘附和粘附抑制试验证实，与其它非菌毛粘附素如S层及外膜蛋白相比，Ah4型菌毛的粘附作用较为显。抗4型菌毛抗体和抑制细菌的粘附力达80％以上。抗S层、外膜蛋白抗体也能使细菌的粘附力下降，表明Ah的粘附作用由菌毛粘附素与非菌毛粘附素共同参与。     

嗜水气单胞菌菌种的限定代次及保存条件研究

将嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila ,Ah)J 1菌株第 5代菌种通过鲫鱼体内复壮后 ,制备基础种子。将基础种子在普通营养琼脂培养基上连续传至 10代 ,分别测第 1代和第 10代的培养特性、免疫原性以及其毒力 ;同时 ,对Ah菌种的保存条件进行了优化。结果嗜水气单胞菌菌种在 1～ 10代之内 ,其培养特性、免疫原性以及毒力完全相同 ,表明嗜水气单胞菌基础种子的使用限定代次至少可达 10代。Ah菌种以 15 %甘油肉汤、 - 2 0℃保存为佳 ,保存期可达两年。     

副猪格拉瑟菌5型细胞致死性膨胀毒素CdtB破坏猪呼吸道上皮屏障的机制

旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示，蛋白质条带分布在55～100 ku,经透射电子显微镜(TEM)观察，OMVs的粒径在100～200 nm,纳米粒子直径分析(NTA)结果显示，样品在100～200 nm处的粒子数目最多。进而用制备的HbpA及OmpP2多克隆抗体对OMVs及不含OMVs的细菌上清进行Western blot验证，证实所提取的样品为外膜囊泡，且进一步结果证明细胞致死性膨胀毒素(CDT)在GPS培养物中主要以OMVs的形式存在。用OMVs或CdtB处理猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)36 h,检测STEC中cleaved-caspase3、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平，并用FITC-葡聚糖(FD-4)检测STEC单层细胞的细胞旁通透性。结果发现，OMVs与CdtB处理后凋亡相关蛋...     

OppA对副猪格拉菌突破猪呼吸道上皮屏障的影响

为了探究寡肽结合蛋白OppA在副猪格拉菌(Glaesserella parasuis, GPS)突破猪呼吸道上皮屏障过程中的作用，采用自然转化法构建副猪格拉菌HPS5-SQ的oppA缺失株ΔoppA,并通过测定ΔoppA在不同培养基中的生长曲线、黏附猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)、穿透猪呼吸道上皮屏障、损伤紧密连接蛋白等能力来判定OppA对GPS定殖和突破猪呼吸道上皮屏障的影响。结果显示：通过PCR和Western blot验证，试验成功构建了ΔoppA,表达的重组OppA具有结合血红素功能；ΔoppA和HPS5-SQ野生株在TSB培养基中生长速度相当，黏附STEC能力没有差异；在加入血红素DMEM中，野生株的生长速度比ΔoppA快，对猪呼吸道上皮屏障破坏和紧密连接蛋白损伤能力比ΔoppA强。结果表明：OppA摄取血红素促进GPS生长，进而加速猪呼吸道上皮屏障损伤。