野生大豆△'-吡咯琳-5-羧酸合成酶(P5CS)基因的克隆与序列分析

根据栽培大豆(Glycine max)△'-吡咯琳-5-羧酸合成酶基因的全长序列设计引物,通过RT-PCR直接扩增的方法从野生大豆中克隆到了野生大豆(Glycine soja)的同源基因,命名为GsP5CS.GsP5CS最大开放阅读框为2148bp,编码含有716个氨基酸残基、分子量为77.9 kDa的蛋白,预测等电点6.21.亲疏水性分析显示,GsP5CS含有连续的亲水片断.序列分析显示,GsP5CS与栽培大豆(Glycine max)、飞蛾豆(Vigna aconitifolia)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)、紫花苜蓿(Medicago sativa)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sati-va)、普通小麦(Triticum aestivum)等植物的△'-吡咯琳-5-羧酸合成酶基因高度同源,序列相似性分别为94%、87%、87%、86%;75%、74%、72%.根据野生大豆与这8种植物的P5CS基因序列相似性所建立的进化树,显示与传统的分类地位基本一致.     

大豆细胞质COXⅡ基因的分离及序列分析

目前关于细胞质雄性不育的机理研究主要集中在植物线粒体上,通过参考大豆线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ(COX Ⅱ)基因序列,合成保守基因引物,从供试材料中克隆到了COXⅡ基因,对基因序列分析表明:该基因编码了一个有280个氨基酸组成的蛋白,推测其可能与大豆细胞质不育有关.     

大蒜抑菌成分提取方法及抑菌活性的研究

以番茄早疫病菌{Alternaria solani(Ellis et Mmartin)}为供试菌,以抑菌圈法检测抑菌活性,系统地研究了大蒜(Allium sativum L.)抑菌有效成分的提取方法,发现鲜蒜在室温粉碎后,放入28℃培养箱中酶解30～60 min,然后加入乙酸乙酯试剂在28℃振荡提取12 h获得的提取物抑菌活性最佳;通过大蒜提取物抑菌活性与TLC和HPLC检测结果比较,证实大蒜提取物中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎过程中产生的,主要为大蒜酶酶解蒜氨酸产生的大蒜素和大蒜素进一步分解产生的其他含硫化合物,其成分多达18种以上,且易挥发成分抑菌活性最好。     

转双价抗虫基因Bt-pta玉米植株的获得

以7922、8902、4112、340和853为受体材料,研究不同基因型的愈伤组织诱导与再生芽苗的关系,其中7922芽苗率为76.4%;8902、4112、340芽苗率分别为8.2%、12.7%和0%和11.8%,结果显示7922主要以体胚发生为主,芽苗率高,是遗传转化的良好受体材料。且胚性愈伤组织随着继代次数的增加变异率随之增加,应尽量减少继代次数以提高转化率。研究进一步利用PDS-100型基因枪将包含抗除草剂基因（bar）、苏云金杆菌毒蛋白基因（cryIA(a)）和半夏凝集素基因（Pinellia ternata agglutinin, PTA ）的聚合载体p3300-bt-pta导入7922的胚性愈伤组织,经PPT（3mg/L）筛选,获得抗性愈伤组织和再生植株。从获得的28株再生植株中筛选获得22株具有除草剂抗性的植株,PCR分析表明有7株同时含有Bt、PTA、Bar 三个基因,共整合的频率为31.8%,结果表明将多价抗性基因同时导入玉米获得多抗的转基因玉米材料是可行的,这为通过转基因聚合育种培育创造同时抗鳞翅目害虫和同翅目害虫的玉米品种奠定了基础。     

球孢白僵菌硝酸还原酶基因同源重组载体的构建

根据已报道球孢白僵菌(Beauveria bassiana)硝酸还原酶基因(nitrate reductase,NR)序列设计引物,从球孢白僵菌D1-5菌株基因组DNA中扩增并克隆该基因上下游片段NR1和NR2,成功构建了球孢白僵菌NR基因同源重组敲除载体,以期敲除球孢白僵菌的NR基因,建立白僵菌同源重组基因敲除体系。     

马铃薯Y病毒属三种病毒通用型单克隆抗体的鉴定

构建了马铃薯Y病毒属的大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus,CLYVV)的原核表达载体pET28-SMV CP、pET28-PVY CP和pET28-CLYVV CP,经IPTG诱导、表达和纯化,获得SMV、PVY和CLYVV的CP蛋白。采用ELISA方法,用9株实验室制备的单克隆抗体对含SMV、PVY、CLYVV的病毒汁液和纯化的重组CP蛋白进行检测分析。结果表明,9株单克隆抗体均识别SMV病毒,2D3、4F9、4G12和6E7单克隆抗体能够识别PVY病毒,4F9和4G12能够识别CLYVV病毒,但PVY、CLYVV病毒与抗体的亲和力低于SMV病毒;对于重组表达的衣壳蛋白:SMV、CLYVV与抗体2D3、4F9、4G12和6E7反应强烈,PVY与4F9和4G12抗体反应稍强。综上,本研究鉴定出能识别SMV、PVY、CLYVV的通用单克隆抗体4F9和4G12。     

玉米秸秆堆肥对番茄产量和品质的影响

为更有效地解决设施土壤连作障碍,以吉林省主要农业废弃物玉米秸秆为原料,高温堆肥无害化处理后作为基质栽培番茄展开研究。结果表明:玉米秸秆堆肥理化性质比土壤更适合作物生长,且养分含量也高于后者。采用玉米秸秆堆肥基质栽培的番茄植株生育期提前4 d,平均单果质量214.3 g、单株坐果数25.2、平均产量达28 816.3 kg/667m~2,分别对照土壤栽培增加16.98%,24.13%,45.21%,干物质、灰分、维生素C和蔗糖含量也高于土壤栽培。     

玉米秸秆腐解菌剂对种养废弃物堆肥的影响

为探求秸秆腐熟剂与猪粪对秸秆堆肥的腐熟效果,应用实验室研制的秸秆腐解菌剂,开展了种养废弃物堆肥发酵生产有机肥试验。通过检测温度、含水率、pH及有机质含量等堆肥腐熟度指标,结果表明:加菌剂的猪粪堆肥处理组(T_4),堆肥温度上升快,且持续时间长,60℃以上温度共持续8 d,最高温度达到68℃;堆肥水分蒸发快,比其他处理组含水率下降幅度较大,含水率由65%下降至37%;pH变化范围为7.7~9.2,表现弱碱性;有机质含量变化显示,T4处理堆腐时间较添加猪粪处理(T_3)提前4 d,比菌剂处理(T_2)提前8 d完成堆腐,表现出比其他处理明显缩短堆腐时间。为观察秸秆腐解菌剂对秸秆横截面结构变化的影响,利用扫描电子显微镜(扫描电镜)对3种秸秆处理组进行了比较分析。     

大蒜提取液对番茄主要病原真菌的抑制作用

以进口杀菌剂爱苗和国内常用杀菌剂多菌灵为对照,研究了大蒜提取液对番茄4种病原真菌的抑制作用。结果表明:爱苗对4种病菌的抑制作用最大,大蒜提取液抑菌作用好于多菌灵。大蒜提取液对炭疽菌的EC90为586倍稀释液,对早疫菌、叶霉菌和灰霉菌的EC90分别为149,173,446倍。大蒜提取液和2种农药对番茄4种病原真菌有很强的抑制作用,但不同药剂有不同的专一性。     

新时期农业科研单位科研秘书工作的实践与体会

科研秘书是科研管理队伍中的一支重要力量。要想干好科研秘书工作,就一定要不断增强服务意识,完善知识结构,强化服务能力,在管理和服务上不断创新,为推动科技创新事业发展作出贡献。结合具体工作实践,文章全面阐述了科研秘书应具备的思想素质和业务素质,并总结出修养助成功,运筹保顺畅,备忘避误事,沟通要诚恳等在科研秘书工作中的几点体会。