副猪嗜血杆菌血清型和外膜蛋白P5基因型多样性的研究

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)的血清型及基因型具有复杂多样性。本研究用间接血凝试验对某一猪场分离的Hps进行血清分型鉴定,并对部分菌株的外膜蛋白P5基因进行克隆测序和进化发育分析。试验结果显示,在21头病死猪不同部位共分离了42株Hps,其中 Hps血清5型17株(40.7%)、血清14型12株(28.5%)、血清4型1株(2.3%)和未定型12株(28.5%)。本试验中有5头猪同时感染2种不同血清型的Hps。21株Hps临床分离株分属5个不同基因序列型(STA～STE),其中STA有12株(12/21)为优势基因型;相同血清型的Hps分离株具有不同的STs型,来自同一头猪的Hps血清型和STs型也不相同。以上结果表明,同一猪群感染的Hps血清型和基因型存在明显的多样性,同一头猪感染Hps的血清型和基因型也存在多样性。本研究为进一步揭示猪群感染Hps的复杂性,研究该病的感染与流行机制提供了有价值的参考。     

3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较

本研究采用改良Thiaucourt's培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae, MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4 h为SC01的迟缓期,4～16 h为对数生长期,lg CCU/mL 最高达到10.7000±0.4700,16～20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D_{420 nm}随着培养时间延长逐渐上升,2 h时为0.0028±0.0002,4～12 h D_{420 nm}增加较缓慢,而12～24 h增加最快,24 h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2 h时lg 拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30 h时lg 拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30 h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。     

犊牛腹泻粪便样本中纽布病毒VP1和RNA依赖性RNA聚合酶基因的序列分析

纽布病毒（Nebovirus，NeV）是国内犊牛腹泻的新发病原，其VP1蛋白含有受体结合位点和中和抗原表位，与病毒的感染和免疫密切相关，本研究旨在分析VP1基因1.2型毒株的分子特征。采用RT-PCR方法，对2019年宁夏和河南的犊牛腹泻粪便样本进行NeV检测，扩增阳性样本完整的主要衣壳蛋白（VP1）和RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）。结果显示，宁夏和河南地区NeV检出率分别为11.32%和8.62%。从4个样本中成功获得了1.2型毒株完整VP1和RdRp序列。4个完整VP1与GenBank中73个完整VP1的氨基酸相似性为75.4%~97.8%；与GenBank中仅有的3个1.2型VP1相比，4个毒株在P2区有1个共同的氨基酸突变，在P1区有2个共同的氨基酸突变。与国内基因1.1型、1.3型和1.4型毒株相比，在P2区分别有9、18和14个共同的氨基酸突变，在P1区分别有2个共同的氨基酸突变，在S区分别有1个共同的氨基酸突变。4个完整RdRp均为NB-like基因型，与GenBank中8个完整RdRp的核苷酸相似性为67.2%~94.8%。本文首次在我国检测到VP1基因1.2型毒株，成功获得了4条基因1.2型毒株的完整VP1和RdRp序列，为国内NeV的分子流行病学和遗传进化研究等提供了参考。     

牛环曲病毒研究进展

牛环曲病毒（bovine torovirus,BToV）是套式病毒目（Nidovirales）托巴套氏病毒科（Tobaniviridae）环曲病毒属（Torovirus）的成员,是重要的牛腹泻病原。该病毒对呼吸道和消化道具有双重组织嗜性,也是一种可能的呼吸道致病因子。BToV已经在中国、美国、日本等17个国家检出,具有广泛的地域分布。该病毒在国内是新发病毒,本文就BToV的分子生物学特性、流行概况、所致疾病的临床症状与病理变化、检测方法等研究进展做一综述,以期为BToV的研究提供参考。     

实时荧光定量TaqMan-PCR检测鸭瘟病毒方法的建立

根据GenBank中鸭瘟病毒UL6和UL7基因的序列,设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增位于UL6和UL7基因第891￣991位长度为101bp片段。以DPV标准强株DNA为模板,建立了实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法。该方法只能在鸭瘟病毒DNA样本中检出荧光信号,最小检出量为1.57×102copies(23.7fg);线性范围达8个数量级;平行复管检测,组内变异系数为0.84%(n=20),同一组样本(n=6)间隔30d重复检测,结果无显著性差异;对试验感染鸭肝脏和脑组织中鸭瘟病毒的检出率为100%(40/40),对临床病例的检测结果与病毒分离鉴定结果一致;从核酸提取到报告检测结果仅需3h;对鸭正常组织、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、鸡源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌等非鸭瘟病毒DNA检测,不出现非特异性荧光信号。     

引进新丹系大白母猪原种与原种一代繁殖性能比较

正母猪的繁殖性能是影响生猪养殖产业最重要的因素之一,直接关系养猪业的发展。因此,如何提高母猪的繁殖性能,发挥母猪最佳的生产性能成为养殖企业和遗传育种研究的重点。猪的繁殖性状是受微效多基因控制的数量性状,且遗传力(h)低(0.1≤h2≤0.15)~([1]),因此需要常规育种和分子育种等多种     

干酪生产中微生物分布与溯源分析的研究

为进行干酪生产中NSLAB等微生物溯源体系的研究，2013年间，笔者对北京市两家干酪生产厂家的环境和生产设备，如料斗车、干酪槽、浸酶池、灌装间墙壁、切刀、压榨机、包装机和盐渍机等进行了大量采样分析和调查，并对采集样品中分离出的目的菌株进行了生理生化鉴定及分析。研究结果表明，干酪生产环境中的主要微生物有枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、微球菌和马克斯克鲁维酵母等。在此基础上，研究者对各种来源样品中的微生物利用16SrRNA分子生物学技术建立了目的菌株来源系统发育树，以此来进行基因序列比对分析，确定了干酪生产中多种微生物的主要来源，为建立干酪生产中NSLAB溯源体系提供了条件。     

绵羊肺炎支原体延伸因子Tu基因的分子特性分析

对绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)参考菌株Y98株和11个临床分离株的tuf基因进行克隆、测序,生物信息学分析及构建进化树,分析绵羊肺炎支原体tuf基因的分子结构特性。结果表明:Y98株和11株分离株tuf基因编码区全长1 209bp,编码402个氨基酸,氨基酸相似性为93.3%~100%,有较高的抗原指数和抗原表位,不含信号肽,平均GC含量为39.80%。Y98株与10个分离株延伸因子Tu存在1个跨膜区,含有6种不同的功能位点。而一分离株该蛋白质存在2个跨膜区,在271—274位点多出1个N-糖基化位点。12个菌株的tuf基因有117个单核苷酸突变位点,其中无义突变为41个,有义突变为76个,造成53个推导的氨基酸变化,主要发生在325—354位点靠近羧基端,有可能导致该蛋白质功能的改变。基于该基因的遗传进化与全基因组建立的进化关系一致,比16SrRNA基因更适合作为绵羊肺炎支原体进化关系的分子靶标。该基因种内保守同时也存在遗传多样性,作为分子分型的潜力值得进一步研究。     

招标代理机构绩效评估研究

通过对招标代理机构存在的问题进行分析,针对问题和有关法律法规设计了绩效评估的指标,简述了各种评估方法的优缺点,建议选用层次分析法进行绩效评估,从而对招标代理机构进行约束和评价选优。