菲律宾蛤仔寡肽抗前列腺癌DU-145细胞的机制研究

为研究人工合成的菲律宾蛤仔寡肽体外抗前列腺癌细胞DU-145的活性及作用机制,实验采用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western blot等方法检测人工合成菲律宾蛤仔寡肽作用于DU-145细胞后细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、细胞色素C表达、caspase3、caspase9的变化,并用电子显微镜观察细胞超微结构的改变。结果显示,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,DU-145细胞的抑制率逐步增高,当药物浓度为2.5 mg/m L时,24 h抑制率为49.9%±4.1%,72 h抑制率为97.2%±7.34%;Hoechst33258染色和电子显微镜下观察发现,加药组细胞出现细胞核固缩、染色质凝集和细胞核碎片化等细胞凋亡的典型特征,随着药物浓度的增加,凋亡的细胞逐渐增多;线粒体膜电位逐步下降;Western blot检测显示药物作用后细胞内Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值增加,Cyt-C、caspase-3、caspase-9表达增加,且与药物浓度成正相关。研究表明,人工合成菲律宾蛤仔寡肽能诱导人前列腺癌细胞DU-145凋亡,可能机制为上调Bax表达、下调Bcl-2表达、增加Bax/Bcl-2比值,诱导线粒体膜电位下降,促使Cyt-C转移并激活caspase家族发生级联反应。     

白茶寡肽的抗氧化活性研究

对白茶寡肽的氨基酸序列及其抗氧化能力进行研究,将有助于了解白茶功效的物质基础。本研究首先制备白茶寡肽,对其氨基酸序列构成进行分析,然后通过测定其对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基清除率、总还原力和HepG_(2)细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性,进而评价其抗氧化能力。结果表明,白茶寡肽DPPH自由基清除能力的半抑制浓度(IC_(50))为0.170 mg·mL^(-1),羟自由基清除能力的IC_(50)为0.850 mg·mL^(-1);白茶寡肽的总还原力呈现浓度依赖性;进一步的细胞实验还发现白茶寡肽能使HepG_(2)氧化损伤细胞中SOD活力增强。白茶寡肽不但具有较强的体外抗氧化活性,而且对HepG_(2)细胞氧化应激损伤具有保护作用。     

石金钱龟板来源的寡肽与环氧合酶-2相互作用机制

为探究石金钱龟板来源的寡肽KNGP能否作为COX-2（环氧合酶-2）的新型抑制剂，通过紫外分光光度法测定石金钱龟板肽YPTP、合成肽段KNGP和RG的IC₅₀值，利用内源荧光、同步荧光、三维荧光光谱和ANS（1-苯胺基-8-萘磺酸）荧光探针法分析KNGP对COX-2的疏水性影响，利用分子对接方法分析KNGP与COX-2间的相互作用方式。结果显示，YPTP、KNGP和RG的IC₅₀值分别为0.609、0.046和0.056 mg/mL，KNGP的IC₅₀值低于阳性药布洛芬（IC₅₀=0.217 mg/mL），说明KNGP对COX-2具有显著的抑制潜力。内源荧光结果显示KNGP对COX-2的作用为静态猝灭且有单一作用位点，同时热力学参数计算结果显示，KNGP和COX-2的结合过程中疏水作用是主要驱动力，且KNGP和COX-2结合的是由熵驱动的自发过程。同步荧光、三维荧光光谱和荧光探针结果显示COX-2中的酪氨酸与色氨酸的疏水环境发生变化，且其表面的疏水性减弱。KNGP与COX-2的分子对接显示，KNGP分子主要通过NH基团、C=O结构、吲哚和咪唑结构与COX-2活性中心的氨基酸残基形成氢键和疏水相互作用，并通过形成静电作用增强结合的稳定性。以上结果表明， KNGP能与COX-2的单一位点通过氢键和疏水相互作用结合形成复合物，并改变酶的二级结构来抑制其活性。     

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术与分子对接技术对人参降血糖活性寡肽的筛选研究

目的应用液质联用和分子对接技术筛选人参中抑制α-葡萄糖苷酶的活性寡肽类成分。方法针对人参醇提物的精制组分,应用UPLC-QE-Orbitrap-MS质谱法鉴定精制组分中寡肽类成分,应用分子对接技术进一步对潜在α-葡萄糖苷酶的活性成分进行筛选。结果人参醇提物的AB-8大孔树脂50%乙醇洗脱部位含有寡肽类成分,经质谱分析共鉴定出3个寡肽类结构,包括Gly-Tyr、Gly-His、Val-Leu。这些化合物分别与α-葡萄糖苷酶进行分子对接,结合能均大于-4.25kcal/mol,表明这3个寡肽与α-葡萄糖苷酶能自发结合。将三个寡肽与α-葡萄糖苷酶生成复合物通过可视化分析,发现人参中寡肽类成分主要通过氢键、范德华力与活性中心ASP-203、ASP-327、ARG-526、ASP-542氨基酸残基相互作用。结论人参中寡肽类成分具有潜在抑制α-葡萄糖苷酶的作用,为其进一步开发降血糖相关大健康产品应用提供了科学依据。