微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。     

微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析

应用多个抗原袁位预测软件对微小隐孢子虫CP15、P23和CP15/60三个子孢子表面抗原的氨基酸序列进行T细胞袁位预测及分析,从中选取了三个抗原表位富集的基因片段,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)将该三个基因片段串联在一起,各基因片段之间以柔性氨基酸(GGGGS)碱基序列链接,得到的拼接片段命名为CpTm.将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pET-CpTm,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.结果成功地构建了CpTm串联基因并在大肠杆菌中以可溶形式高效表达,质谱分析表明重组表达蛋白包含了上述三个抗原的氨基酸序列.Western blot分析显示该重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清及隐孢子虫鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重组表达蛋白免疫兔血清识别,制备的抗血清能被重组蛋白特异性识别,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为多表位疫苗的研制奠定了基础.     

水稻苗期叶片白化转绿性状研究进展

白化转绿突变体在基础理论研究和实际应用研究方面均具有重要意义.介绍了国内外在水稻白化转绿突变体材料的发掘、生理生化特性、性状遗传、基因定位及克隆、分子作用机理和作为标记性状基因应用等方面的研究进展.     

烟草病虫害生物防治的研究进展

烟草是我国重要的经济作物之一,其虫害种类繁多,给烟草生产带来的极大的危害,造成了巨大的损失。从生防微生物、天敌昆虫、昆虫信息素和转基因技术在烟草病虫害防治方面对烟草病虫害生物防治的研究进展进行了综述,以期为同类研究提供借鉴参考。     

12个微卫星DNA标记在江口萝卜猪群体中的遗传多样性研究

采用12对微卫星引物对江口萝卜猪群体的遗传多样性进行研究。结果发现12个微卫星位点在江口萝卜猪群体中均具有多态性,平均基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数分别为0.760 1、0.707 9和4.173 7。实验结果表明,江口萝卜猪群体具有较高的遗传多样性,群体内部变异较大,若通过家系育种有较大的选育潜力。     

微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备

以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。     

草原有毒植物乌头中毒及治疗

近几年由于草原载畜量过大,放牧过度,造成有毒植物大量滋生。尤其在伊犁草原乌头草已给畜牧业生产带来了严重影响,本文就乌头草的生长特点、毒性和中毒治疗给予介绍。     

田间作业机器人电动升降底盘设计

设计开发了一种田间作业机器人电动升降底盘,主要结构包括主机架及安装在主机架上的电源、控制器、行走机构、转向机构和升降机构。介绍了其主要组成和工作原理。该底盘可方便地实现车轮独立驱动、车轮独立转向、车轮距独立可调以及平台自动升降等功能,对我国田间作业机器人产业的自主发展具有重要意义。      

多棘海盘车用作新型海洋食品原料的可行性研究

多棘海盘车（ Ａｓｔｅｒｉａｓ ａｍｕｒｅｎｓｉｓ） 在中国沿海居民中有长期食用的历史,其可食部为生殖腺（ 海星黄） ,但有麻辣感。海星黄含蛋白质达１５ ．４６ ％ ,其氨基酸组成齐全,必需氨基酸间比例合理。海星黄还富含微量元素、维生素、脂肪等营养元素,脂质中不饱和脂肪酸含量尤为丰富。海星黄麻辣味可能由硫酸酯甾体皂甙引起,大部分可通过脱麻辣味及脱毒操作除去。急性毒性试验中,小鼠灌胃８ 和１２ ｇ／ｋｇ 脱毒的海星黄,未见毒性反应;短期喂养试验（１２ ｇ／ｋｇ ,３０ ｄ） 也未见毒性反应。两项试验中,小鼠肝、心、肾、肺和脾均未见异常。建议人的最大无毒剂量１ ｇ／ｋｇ ,最大允许摄入剂量０ ．５ ｇ／ｋｇ 。海星黄经脱麻辣味及脱毒、调味等步骤,制得２ 种食品,具有较好的感观且营养丰富。海星壳所含蛋白质主要为胶原蛋白,以胃蛋白酶促溶蛋白为主,具有典型胶原蛋白氨基酸组成特点,可在食品工业用作明胶。初步结论为,多棘海盘车可用作高营养、无毒、加工利用性好的新型海洋食品原料。     

黄陵庙古建筑白蚁危害情况调查

为更好地实施黄陵庙古建筑白蚁综合治理项目,于2016年5月对黄陵庙古建筑白蚁发生种类和危害情况进行了系统调查。结果表明:危害黄陵庙古建筑的白蚁种类为截头堆砂白蚁、黑胸散白蚁、黄胸散白蚁和台湾乳白蚁等4种;禹王店、武侯祠、屈原祠、山门、碑廊、覃家祠堂、文物展厅、文物仓库、望江楼等部位均受到较为严重的白蚁危害,整个古建筑受害面积达到65%左右。