尼罗罗非鱼精巢支持细胞分离培养体系建立及优化

本研究分离培养尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)精巢支持细胞(Sertoli cells, SCs)，建立并优化尼罗罗非鱼精巢支持细胞分离培养体系。无菌条件下，取发育至第Ⅲ期的尼罗罗非鱼精巢，PBS清洗后，剪碎精巢组织，0.25%胰蛋白酶消化，用含10%犊牛血清(Newborn bovine serum, NBS)的L-15培养液终止消化，过滤、离心，获得细胞。差速贴壁法获得SCs后，在26℃、无CO2饱和湿度恒温培养箱中培养。分别采用含10% NBS的L-15、M199、F12培养液，含5%、10%、15% NBS的L-15培养液，含1%罗非鱼血清的L-15+10% NBS培养液培养尼罗罗非鱼SCs。各组每2 d取细胞计数，绘制SCs生长曲线；甲基绿染色，倒置显微镜下观察SCs的形态。尼罗罗非鱼SCs培养1~2 d，细胞贴壁；培养3~5 d，细胞完全贴壁并迅速增殖。单个SCs呈不规则多边形，其核位于胞质中央，呈卵圆形，胞质中可见吞噬颗粒和空泡，空泡聚集于支持细胞胞质的两极或散布于核的四周。SCs在L-15培养液中贴壁生长，在F12、M199培养基中较难贴壁。与F12、M199培养液相比，L-15培养液更有助于尼罗罗非鱼SCs生长增殖(P<0.01)。与添加5%和15% NBS相比，在L-15培养基中添加10% NBS更有助于尼罗罗非鱼SCs生长增殖(P<0.05)。与未添加尼罗罗非鱼血清相比，在10% NBS+L-15培养中添加1%尼罗罗非鱼血清，能显著促进SCs生长增殖(P<0.05)。研究表明，采用胰酶消化差速贴壁法获得尼罗罗非鱼精巢支持细胞，10% NBS+1%罗非鱼血清+L-15培养液培养，能显著促进尼罗罗非鱼精巢支持细胞生长增殖。     

1株羊链球菌的分离鉴定及药敏试验

从青海省大通县城关镇某羊场病死羊肺脏、脾脏、肝脏等病料中分离得到1株细菌,经对分离菌的形态、培养特性和菌株革兰氏染色观察以及生化试验鉴定,结合发病羊临床症状、病理剖检变化,判定该分离菌为链球菌。通过K-B药敏纸片法进行病原菌耐药性检测,结果表明该病原菌对头孢噻吩、头孢他定、阿奇霉素以及磺胺间甲氧嘧啶高度敏感,对其他药物表现出不同程度的耐药性。     

青花椒采收机环切式穗枝分离装置设计与试验

青花椒采收过程中，果皮上散生多数突起的油苞极易破裂导致果实干后变黑，有效成分挥发而严重影响质量。青花椒的油苞破损程度直接影响其品质，在保证花椒低油苞破损率的前提下，为实现花椒机械化采收，基于枝条环切原理，设计了一种花椒采收机的穗枝分离装置。通过理论分析得到影响采收效果的结构参数和作业参数，并根据花椒枝条物理特性和加工经济性进行优化。选取环切式穗枝分离装置的环切刀刃口角度、环切刀转速和枝条进给速度为试验因素，以花椒采收效率和油苞破损率作为评价指标，进行了单因素试验及二次正交旋转组合试验。采用响应曲面法对试验结果进行分析并找出主控因素，运用Design-Expert软件的多目标优化算法进行参数优化。结果表明，枝条进给速度是影响花椒采收效率和油苞破损率的主要因素，枝条进给速度与花椒采收效率成正比关系。各因素对花椒采收效率和油苞破损率的影响程度由大到小依次为枝条进给速度＞环切刀转速＞环切刀刃口角度。随着枝条进给速度的增加，花椒采收效率迅速提高，花椒油苞破损率先缓慢增加后急剧增加。随着环切刀转速的增加，花椒采收效率并无明显增加，在枝条进给速度＜0.4 m/s时，花椒油苞破损率随环切刀转速增加先小幅减小后趋于平稳最后小幅增加，在枝条进给速度＞0.4 m/s时，花椒油苞破损率随环切刀转速增加平稳减小。该装置最优参数组合:环切刀转速2 800 r/min，枝条进给速度0.45 m/s，环切刀刃口角度25°。样机田间试验表明，花椒采收效率和油苞破损率分别为50.7 kg/h和6.7%，优于目前人工采摘作业效果。      

鸽源绿脓杆菌的分离鉴定及致病性试验

从疑似赛鸽绿脓杆菌感染病料中分离绿脓杆菌并进行相关致病性试验和药敏试验,为今后赛鸽绿脓杆菌防治提供参考。采用常规方法从肝脏、肺脏等组织中无菌钓取细菌于普通琼脂、麦康凯、鲜血琼脂平板培养基中,随后进行染色镜检、生化试验鉴定;对分离菌株进行致病性研究,将10只未经免疫的30～40日龄的雏鸽随机分为对照组和试验组进行感染,10只BALB/c小鼠同样随机分组进行感染,观察并记录感染动物临床症状及死亡率;通过药敏试验检测该菌对庆大霉素、恩诺沙星、复方新诺明等10余种药的敏感性。结果表明,分离得到的菌株根据培养及菌落特征、生化试验确定为绿脓杆菌;人工感染小鼠发病率为100%,死亡率为60%;试验组鸽子发病率为60%,无死亡;该菌对庆大霉素、恩诺沙星、妥布霉素和环丙沙星高度敏感。     

秦巴山区魔芋白绢病病原菌的鉴定及生物学特性的测定

对秦巴山区魔芋白绢病病原菌进行了分离、鉴定和生物学特性测定。结果表明,菌株M3具有致病性,菌落正面白色,菌丝发达呈放射状,背面呈淡浅黄色,后期形成茶褐色菜籽状菌核,直径为1.2～2.3 mm,具有蘑菇气味;经16 S rDNA-ITS序列相似性分析,该病原菌与罗耳阿太菌Athelia rolfsii(KY640625.1)相似性达100%,结合形态学特征,将其鉴定为罗耳阿太菌Athelia rolfsii,属于半知菌亚门,其无性态为齐整小核菌Sclerotium rolfsii;菌株M3的最适生长温度为28℃,最适生长pH值为7,碳源利用以麦芽糖最好,乳糖最差;氮源利用以酵母粉最好,硝酸铵最差。该研究结果为秦巴山区魔芋白绢病的绿色防控和综合治理提供了依据。     

湘西北地区规模化奶牛场犊牛腹泻沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为查明湘西北某规模化奶牛场犊牛腹泻的主要病因,采用细菌培养、平板划线法分离、鉴别培养基分离、革兰氏染色、生化鉴定等方法对细菌进行分离与鉴定;选取28种抗菌药用Kirby-Bauer纸片法进行药敏试验。结果表明,分离出9株沙门氏菌。沙门氏菌对丁胺卡那和头孢他啶敏感,敏感率为7.14%;对庆大霉素和头孢曲松中介,中介率7.14%;对诺氟沙星、红霉素、氧氟沙星等24种药物产生耐药性,耐药率为85.71%。说明沙门氏菌是引起该场犊牛腹泻的主要原因之一,临床上沙门氏菌的耐药性较高,应引起高度重视。     

酸性土壤中决明属牧草高效根瘤菌的分离及筛选

为提高豆科决明属（Chamaecrista spp.）牧草的结瘤能力和固氮效率，促进决明属牧草在酸性土壤中的应用及推广，本研究以圆叶决明（Chamaecrista rotundifolia）和羽叶决明（Chamaecrasta nictitans）为试验材料，通过分离、纯化、nodA基因鉴定等方法，从酸性土壤里决明属牧草的根瘤中分离到10株候选根瘤菌株系。16S rDNA测序及系统发育树分析表明，这10株根瘤菌均属于慢生型根瘤菌。回接试验表明，上述10株根瘤菌均能与圆叶决明共生，形成根瘤。与不接种的对照相比，其固氮酶活性为0.08~4.65 μmol·g^-1·h^-1，植株干重、SPAD值和氮含量分别提高了99.17%~372.14%，399.27%~789.05%，235.00%~1043.33%。其中，4株根瘤菌TXR2，TXN1，WYSR1，JYN6对圆叶决明氮营养贡献最大，并且TXN1与宿主共生形成的根瘤数目最多，而JYN6的固氮酶活性最高。说明本研究分离鉴定到4株决明高效根瘤菌，具有较好的应用前景。