红树林植物共附生放线菌的分离鉴定及其抗菌活性分析

笔者采用4种分离培养基对10份采集自海南岛西线海岸的红树林植物进行了茎的共附生放线菌分离，并利用16S rRNA序列分析法对分离得到的放线菌进行鉴定，采用滤纸片扩散法对分离得到的放线菌的发酵产物进行抗菌活性分析。结果共分离获得63株放线菌，初步确定16株代表性放线菌的分类地位。16株代表性放线菌中，有13株放线菌属于链霉菌属，有2株放线菌属于小单孢菌属，其中5株链霉菌为潜在的新物种。抗菌活性测试结果显示，16株代表性放线菌的发酵产物对至少1种指示菌具有抗菌活性。从菌株HNM0645的发酵粗提物中分离获得了1个化合物A，经过结构鉴定为已知化合物K-252a。通过测试不同浓度化合物A对山药炭疽病原菌的抑菌率，利用Excel求出毒力回归方程，计算出EC₅₀值为286.61 μg·mL?1，化合物A对供试细菌没有明显的抑菌活性。     

猪圆环病毒3型Rep蛋白的表达与多克隆抗体制备

为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,Rep在大肠杆菌中获得大量表达,且主要以包涵体形式存在,重组蛋白相对分子质量约为32 000,经纯化后得到单一条带。表达的重组Rep蛋白可以与PCV3阳性血清发生反应。制备的大鼠抗Rep血清与表达的重组Rep蛋白发生特异性反应,且效价大于1∶32 000。表明本试验表达的Rep具有良好的免疫原性和反应原性,为PCV3的ELISA诊断试剂盒研制提供依据。     

酒炙车前子防治奶牛胎衣不下中有效物质分离体系的确定

酒炙车前子防治奶牛胎衣不下是验方,本实验室验证酒炙车前子在防治奶牛胎衣不下方面有着显著的疗效,并确定了有效部位。但其防治奶牛胎衣不下的有效物质基础尚不明确。因此本试验目的是确定一个能够将其有效部位中所包括的化合物按照极性由低到高分离成三部分的体系。通过预实验确定了分离二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的洗脱剂和展开剂体系。使用相同内径的层析柱,其中硅胶的高度设置成3个梯度:15,25,35cm,使用洗脱剂进行梯度洗脱后,利用薄层色谱法进行检测,由色谱图观察化合物是否能成功分离成三部分。二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的结果显示,柱高15cm条件下无法有效地分离化合物,柱高25cm条件下化合物回收比例要高于柱高35cm条件下的化合物回收比例。因此确定了二氯甲烷部位分离化合物的洗脱剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为1∶2;石油醚∶乙酸乙酯为1∶30;二氯甲烷∶甲醇为30∶1;展开剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为4∶1;柱体高度为25cm。乙酸乙酯部位分离化合物的洗脱剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为100∶1;石油醚∶乙酸乙酯30∶1;二氯甲烷∶甲醇为30∶1;展开剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为10∶1;柱体高度为25cm。采用干法上样,上样量应适当增加。该分离体系的确定对研究酒炙车前子中防治奶牛胎衣不下的有效物质基础提供了技术支撑,也为研制高效、安全、廉价的防治奶牛胎衣不下的中药制剂奠定了基础。