平欧杂种榛过氧化物同工酶研究

本试验以62个平欧杂种榛品种(系)的新梢韧皮部为试材,利用聚丙烯酰胺垂直平板凝胶电泳,研究其过氧化物酶同工酶谱的特征。结果表明:平欧杂种榛韧皮部的过氧化物酶同工酶酶谱有3个区,共25条酶带,R f范围在0.087~0.557之间,多数品种(系)之间的谱带存在差异,部分品种(系)间酶带数量及强弱不同。62份资源的相似系数在0.5~1之间,距离系数在0~2.00之间。以距离系数1.6为标准,可将供试资源分为5大类。     

陕农138小孢子不同发育时期蛋白质差异的比较分析

为了探索小麦花药发育过程中的蛋白质代谢机理,利用SDS-PAGE电泳对陕农138花药单核早期、单核中晚期和双核期小孢子的全蛋白电泳谱带进行了分析.结果表明,双核期同时出现2条明显的条带或表达丰度大的条带,其分子量分别为50.7、48.2 kD,而这两个条带分别在单核早期和单核中晚期单独出现,认为通过电泳所获得的这些差异蛋白很可能直接或间接参与小孢子发育过程中某些关键的代谢途径;单核中晚期是小麦花药培养中出愈率最高的时期,这些差异蛋白又很可能与小麦花药培养力的表达调控和代谢机理有关.     

从大体积的PAGE凝胶中纯化长链寡核苷酸的新方法

通过比较从大体积的PAGE凝胶中回收寡核苷酸的不同方法,提出回收未银染的长链寡核苷酸的最佳方案:用12 cm×1.5 cm的PAGE凝胶柱分离DNA,然后将凝胶切成长约0.5 cm的胶条,通过PCR反应挑选含有寡核苷酸的胶条。用2 mL的寡核苷酸洗脱缓冲液回收寡核苷酸,反复提取3次。用装填30 mg硅胶的C18 Sep-Pak反相层析柱进行纯化,最后经过离心冻干后即得到纯化的寡核苷酸,该方法的回收率可达(28.7±2.0)%。     

蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化

蜡样芽孢杆菌是一种致病性病原菌,能引起胃肠感染和非胃肠感染。本研究从实验室分离的蜡样芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌1.026 0、巨大芽孢杆菌1.015 1、蕈状芽孢杆菌1.085 6和苏云金芽孢杆菌1.101 4这五株菌中提取蛋白,利用SDS-PAGE方法纯化,并测定出蜡样芽孢杆菌有3种分子量约为28.5、26.5和20.0 KDa的特征性蛋白,而苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌则没有此特征性蛋白。     

Changes in expression of HMW glutenins of wheat (Triticum aestivum L.) induced by nitrosoethylurea

The application of a chemical mutagen, N-nitroso-N-ethylurea, to the grains of wheat (Triticum aestivum L.) cv. ‘Viginta’, provided a mutant line,‘NT-10′, with an altered composition of high molecular weight (HMW) glutenin subunits. The qualitative mutation was detected in the Glu-B1 locus by electrophoretic analyses of glutenins. Instead of the HMW glutenin subunits 7 + 9 present in the original genotype, a separate HMW subunit 6 was expressed in the mutant line. The other glutenin and gliadin proteins of the mutant line remained unchanged. The mutant line is also characterized by several changes in morphological and physiological characters—stronger stem, wider leaf, bigger spike and higher grain hardness. This is the first communication of the possibility of changing the composition of high molecular weight subunits of wheat glutenin by means of mutagenesis.     

"高效RAPD"技术的初步研究及其PAGE检测

对经典的单引物RAPD技术进行优化．确立了适合于多条引物(2～4条)同时参与同一反应的“高效RAPD”体系及扩增运行条件,不但实现了1次操作检测更多位点、使多样本量RAPD检测变得相对省时省力,同时还可节省珍贵的实验样品。本文采用了具有高分辨能力的非变性PAGE-银染检测方法对RAPD产物进行检测,使一般经琼脂糖电泳检测仅能分辨出不足10条谱带的RAPD产物可分辨出15～30条清晰可见谱带。非变性PAGE-银染检测方法操作安全,银染后的凝胶可长期保存。     

玉米微卫星PCR产物变性与非变性PAGE-银染法的比较分析

对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行比较,探讨建立简便、快速、安全、可靠、经济、效率高、毒害低的应用于玉米遗传多样性分析的SSR标记方法。结果表明,用2对SSR引物对6份玉米自交系基因组DNA进行扩增,将扩增产物在变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上电泳,银染后微卫星扩增产物在二者上的电泳结果存在差异。在变性胶中微卫星扩增产物目的条带清晰,易于鉴定;在非变性凝胶中表现有较多的非特异性条带,但目的条带很明亮,容易看出来,不影响实验结果。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳带型清晰准确、结果可靠、经济快速,能真实地揭示玉米自交系间的遗传多样性,是玉米种质类群划分的有效分子标记方法。     

三种CRISPR/Cas9基因敲除变异检测方法的比较分析

比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、耗时、成本和应用限制等方面进行评估。采用T7核酸内切酶I、限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑马鱼(Danio rerio)突变纯合个体和突变杂合个体进行检测,用野生型个体作对照;同时用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对CRISPR/Cas9方法敲除的ogn和ddb1基因的突变杂合个体进行了检测。结果表明:三种方法均能够区分突变杂合个体,其中T7核酸内切酶I检测法耗时最短,但该方法不能用于鉴定突变纯合个体;限制性内切酶检测法能够用于鉴定纯合个体,但需要有特异性的识别位点;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法能够区分纯合和杂合个体,对序列无依赖性,能够检测出序列中存在的所有变异。成本上,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法最经济;限制性内切酶的价格存在较大的差异,因此检测成本依赖于酶的价格。三种检测方法各有优缺点,在应用实践中可根据试验需要选择合适的方法。     

DON毒素和小麦互作对小麦幼穗细胞可溶性蛋白的影响

 本研究经小麦幼穗细胞和DON毒素混合处理,研究抗赤霉病程度不同的苏麦3号(R)、望水白(R)、延冈坊主(R)、Alondra's (S)、安徽11(S)和仪宁小麦(S)的可溶性蛋白谱带的变化。用3μg/ml的脱氧雪腐镰刀菌烯酸(DON)与小麦幼穗细胞混和处理2、8、24、30h,分别提取可溶性蛋白,进行PAGE测定。结果显示,感病品种有多条谱带消失,如仪宁小麦、安徽11、Alondra's在处理2h后Rf 0.13的条带消失,处理8h后Rf 0.02条带消失,感病品种Alondra's和安徽11在处理24h后Rf 0.05的条带消失。抗病品种的电泳谱带没有变化,如苏麦3号、望水白在毒素处理后蛋白条带没有发生变化,抗病品种延冈坊主在处理24h后RfO.OS、O.11的蛋白带仅有变浅的趋势。研究还表明抗病品种苏麦3号、望水白、延冈坊主具有感病品种没有的Rf 0.3的蛋白带,且在毒素处理前后保持一致。