悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

影响棕色脂肪代谢的调控因素及其应用

脂肪组织分为两类,一类是白色脂肪组织,而另一类则是棕色脂肪组织。棕色脂肪组织(BAT)呈棕色,含有丰富的毛细血管,脂肪细胞内分散着大量小脂滴,线粒体大而丰富,细胞中央有圆形的核。棕色脂肪与白色脂肪之间存在着相互转化的关系,棕色脂肪对扩大动物生态位和增强动物适应外界环境突然改变的能力以及保障幼畜的成活具有重要作用。它还可为治疗人类肥胖以及调节畜禽动物肌内脂肪含量提供研究思路和参考。文章综述了国内外棕色脂肪组织的研究进展,主要从发现过程、调控因素和应用等三个方面进行总结,并对棕色脂肪在未来对人类健康以及动物在肉质和生长代谢方面的育种应用进行展望。     

芝麻新品种驻芝15号高产栽培技术

通过对围内外数百份芝麻种质资源进行性状观察和综合分析,应用性状互补原理,选择河南省驻马店市农科所选育的育种中间材料驻81043作母本、驻92701作父本．于1996年在我所试验场配制组合（驻81043x驻92701优系）,编号为9612。1997年F1春播．田间混收（9612—0）;1998年进行病圃选择．     

中国5个家驴品种mtDNA Cytb基因遗传多样性及起源

对中国 5 个家驴品种 89 个个体 mtDNA Cytb 基因的全序列进行分析,共检测到 26 种单倍型 30 个多态位点,其单倍型多样度为 0.722～0.826,核苷酸多样度为 0.0042～0.0050,表明中国家驴的遗传多态性丰富.构建的NJ系统发育树表明,中国家驴有2个母系起源即索马里和努比亚支系.     

低密度脂蛋白在脂蛋白代谢中的作用及其调控

低密度脂蛋白受体家族是一类结构与低密度脂蛋白受体相似,细胞表面存在可识别和结合多种含载脂蛋白的脂蛋白颗粒配体的细胞膜表面受体群。它们在动物体内脂蛋白的代谢中发挥重要作用。随着分子生物学对LDL受体和VLDL受体基因表达水平与调控水平研究的不断深入,有助于进一步了解高胆固醇血症及动脉粥样硬化等疾病的发病机制,对于指导动物生产(蛋鸡生产、鹅肥肝生产)也具有十分重要的意义。     

畜禽线粒体DNA分子进化研究进展

家养动物的起源进化一直吸引着人们的兴趣。线粒体DNA是一种理想的研究动物进化的分子标记。本文主要介绍了线粒体DNA D-loop序列多态性与畜禽（猪、马、驴、牛、水牛、绵羊、山羊、鸡）分子系统进化研究的最新进展,并对今后的深入研究提出了建议。     

稳定和加强服务体系建设为畜牧业持续发展提供技术支持和服务保障

当前，黑龙江省农业和农村经济步入了一个崭新的发展阶段，即由以往注重量的增长转变为数质并重，增长方式开始由粗放型向集约型转变。在大力推进“科教兴牧”中，各级技术推广与综合服务组织始终是前沿阵地和关键环节，是使科技成果转化为现实生产力的基本手段。因此，必须进一步稳定和加强畜牧兽医综合服务体系建设，使之更好地适应现代化畜牧业发展要求。     

双甲脒等四种杀螨剂的药效对比试验

用国产20%双甲脒乳油、螨克、20%三唑锡胶悬剂、20%三氯杀螨醇的不同浓度药液对元帅、新红星苹果树喷布,调查对苹果全爪螨和山楂叶螨的防治效果。结果表明:国产双甲脒和进口螨克对防治苹果两种叶螨均有特效。使用浓度1000～1500倍,有效控制期在30天以上,全年用药1～2次即可基本控制螨害。     

牛人工授精后血清中孕酮浓度的变化与受胎效果

笔者通过对授精当天、７天后和２０～２２日后牛体血清中孕酮浓度的测定（酶免疫法）与分析，探讨了该法应用于牛的发情鉴定和早期妊娠诊断的可能性。在５２头供试牛中，有４７头（９０．４％）属正常发情（排卵性发情），有１头（１．９％）属假发情（不排卵性发情），另有４头（７．７％）未发情，６０天后妊检结果，有３６头（６９．２％）怀孕，这３６头牛均为正常发情者。输精后第７天血清中的孕酮浓度，妊娠牛（ｎ＝３６）与非妊娠牛群（ｎ＝１６）间无显著差异，但在第２０～２２天后的第二次发情预计日，妊娠牛的孕酮浓度［５．３±１．７（１．２－８．２）ｎｇ／ｍｌ］则显著高于非妊娠牛［１．３±１．２（０．４－５．５）ｎｇ／ｍｌ］。采用此时血清中孕酮浓度指标，判定有４０头牛妊娠，其早期妊娠诊断的准确率在妊娠牛为９０．０％（３６／４０），对非妊娠牛达１００％（１２／１２）。因而，本法在早期妊娠诊断上具有实用价值。     

四合木在宁夏草地的分布、群落类型和经济价值

本文研究了四合木在宁夏草地的分布、群落类型和经济价值。结果表明：分布在宁夏草地的四合木及其群落是我国四合木及其群落分布的最南端。其群落类型属草原化荒漠，群落地理成分具明显的湿带性。四合木初花期叶中含氨基酸8mg／100mg，其中必需氨基酸占所含氨基酸总量的41．41％。药用成分预试表明，其叶中主要含有生物碱、黄酮类、甾醇类、有机酸和酸性化合物。通过11种化学元素含量的测定，四合木屑富Ca植物。