牛源抗腹泻芽孢益生菌的分离与N-4菌株的鉴定

为了获得对痢疾病原菌有拮抗作用的益生菌株,以0.5%牛胆酸盐为筛选压力,痢疾杆菌菌株作为病原指示菌,从健康青年牛的粪便中,分离对痢疾杆菌具有拮抗作用的产芽孢菌株。通过平板生长对峙法进行初筛,共得到对痢疾杆菌具有拮抗作用的菌株26株,利用发酵液平板打孔法进行复筛,选出1株拮抗活性较高的菌株N-4,抑菌圈直径达到17.6 mm。根据N-4菌株形态和生理生化特征,结合对N-4菌株的16S rDNA序列分析结果,最终鉴定N-4菌株为Bacillus amyloliquefaciens。     

高产蛋白酶菌株的分离、筛选及鉴定

为了降解豆粕中的大分子蛋白为大豆肽,利用酪蛋白平板法作为筛选模型,从土壤中分离和筛选高产 蛋白酶的菌株,选取水解圈直径与菌落直径比值较大的菌株液体发酵后进行蛋白酶活力和大豆肽转化率的测定,结 果得到1 株蛋白酶活力和大豆肽转化率较高的菌株B1,其酶活力达到111.8 U/mL,大豆肽转化率达到37.2%。对该 菌株进行形态观察和生理生化特征分析,初步将其鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.）。     

大丽轮枝菌颉颃细菌2-14菌株的鉴定

从棉田土壤中筛选出具有棉花黄萎病病原茵--大丽轮枝茵颉颃活性的2-14菌株,经菌落和茵体形态观察、生理生化鉴定以及16S rDNA鉴定,该茵株为Bacillus velezemis.抑菌谱试验说明,2-14茵株对几种植物病原茵都有抑制作用,有较高研究价值.     

西瓜枯萎病拮抗细菌HD-5菌株的筛选及鉴定

筛选对西瓜枯萎病病原菌西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.f.sp.niveum)具有拮抗作用的芽孢细菌.通过对土样中分离的产芽孢细菌进行初筛和复筛,得到一株具有较强抑菌活性的拮抗芽孢细菌HD-5菌株,并对该菌株进行了形态特征观察、生理生化鉴定和16S rDNA全序列分析.结合HD-5菌株的形态特征、生理生化特性和16 SrDNA全序列分析结果综合考察,判定该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).     

棉花黄萎病拮抗蛋白的分离与纯化

从棉花叶组织中分离到的类芽孢杆菌(Paenibacillus)LC105菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有明显的拮抗作用.该菌株发酵液分别用过滤、高压灭菌及有机溶剂处理,初步证明对大丽轮枝菌产生拮抗作用的物质为蛋白质.LC105菌株发酵液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析及Sephacryl S-100凝胶层析分离纯化,得到了分子量为27 kDa的抗菌蛋白.     

掌叶半夏细胞悬浮培养及单细胞培养再生植株

掌叶半夏成熟胚在含２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上可诱导形成颗粒状胚性愈伤组织。用附加２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．１ ｍｇ／Ｌ，ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的ＭＳ液体培养基对胚性愈伤组织进行悬浮振荡培养，经３￣４次继代培养即可得到悬浮的单细胞，其细胞多为圆形或椭圆形，具有较强的分裂能力。经测定，悬浮培养过程中细胞生长曲线呈“Ｓ”型，培养２０天时细胞数量和鲜重达到最大值；随着     

高效纤维素降解菌短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）T-7的筛选、鉴定及降解能力的研究

为了得到一株具有降解纤维素性能的产芽孢菌株,采用加热富集芽孢菌及刚果红脱色圈的初筛方法,从菜地土壤、动物粪便、青贮饲料等样品中分离筛选出41株能够降解纤维素的产芽孢细菌。对初筛菌株发酵培养,测定发酵液透明圈直径及纤维素酶活力,菌株T-7具有显著的降解能力,纤维素酶活力达1678.89U/mL。通过形态观察鉴定、生理生化实验和16SrDNA序列分析对其进行种属鉴定,鉴定T-7菌株为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）。研究了供试菌株T-7的降解工艺,获得了菌株发挥最大降解特性所需的最佳培养条件。结果表明,将菌株T-7以10亿活菌/1Kg的接种量接入玉米秸秆,并且添加辅助碳氮源2%蔗糖+2%尿素时,在发酵8天后对秸秆中纤维素的降解率达40.34%。研究结果为纤维素的生物降解发掘了新的菌种资源,并为秸秆的大规模降解利用奠定了基础。     

假蕈状芽孢杆菌34kDa纤溶酶成熟肽基因的原核表达、纯化及活性分析

为进一步探讨全长基因和成熟肽基因的关系,根据已发表的假蕈状芽孢杆菌34 kDa纤溶酶全长基因DNA序列(GenBank FJ463037)和纤溶酶活性位点的位置,设计合成一对引物,扩增得到纤溶酶成熟肽基因G(951 bp编码317个氨基酸),连接pET-28a构建pET-28a-G载体,热激转化大肠杆菌BL21,成功获...     

石英砂研磨法快速提取顶头孢霉染色体DNA

本研究的目的是改进头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的提取方法。采用氯化苄法、液氮研磨法以及石英砂研磨法进行比较,从提取的DNA数量及纯度来分析,石英砂法要好于液氮研磨法,与氯化苄法效果相当,但避免了氯化苄的毒性。提取液的pH对结果影响不大,当pH为9.0～10.0之间时,收率稍高;EDTA浓度应大于40 mmol/L。经石英砂研磨破壁,获得了较高质量的染色体DNA,该法与液氮研磨法、氯化苄法相比廉价、快速、安全,且不影响其后续的分子生物学操作。